奶牛胚胎直接投入液氮冷冻保存试验

将奶牛7日龄胚胎,常温下在含128.9g/L甘油PBSS肉孵育20min后移入193.2g/L甘油+85.6g/L蔗糖PBSS内孵育7min,装管后即投入液氮内冷冻保存。182d后解冻8枚,用含342.3g/L蔗糖PBSS脱去甘油,7枚可供移植用,胚胎可用率为87.5％(7/8),移植给7头受体牛,3头妊娠,妊娠率为42.9％。     

小鼠胚胎冷冻保存试验

应用4～10周令的杂种 CB6/Han 和纯种 C57BL/Han 小鼠73只进行试验,共采胚胎523枚,将发育正常,形态完好的157枚胚胎低温冷冻保存。解冻后回收率为83.4％,其中45％(59枚)形态完好,(囊胚56％,桑椹胚20％)。将其培养24—48小时后,71.2％(42枚)继续发育到扩张囊胚(其中囊胚为76.5％,桑椹胚为37.5％)。应用3′6′—二乙酰基荧光素(FDA)染色进行胚胎质量评定,对胚胎无损害。     

家兔原核期受精卵的体外培养

原核期兔胚胎用微滴法分别在mDM液、TCM-199液和PBS液中进行培养,结果表明,发育到二细胞的百分率分别为96.95％(127/131),77.19％(44/57)和72.31％(47/65);发育到四细胞期的百分率分别为95.42％(125/131),64.91％(37/57)和63.08％(41/65);发育到八细胞期的百分率分别为84.73％(111/131),33.33％(19/57)和41.54％(27/65);发育到桑椹胚的百分率分别为67.94％(89/131),19.29(11/57)和23.08％(15/65)。以上结果说明:上述3种培养液中,改良DM液是把兔胚胎从原核期培养到桑椹胚的最佳培养液。     

自制简易胚胎冷冻器冷冻奶牛胚胎试验

用FSH+PGF_(2)超排黑白花奶牛,以非手术方法采得7日龄早期胚胎。应用含10％甘油卵细胞培养液作为胚胎冷冻保护液,采用自制简易胚胎冷冻器冷冻,在-196℃液氮中保存。冻胚在35℃水浴中解冻,应用92.1g/L甘油+171.2g/L蔗糖PBSS,46g/L甘油+171.2g/L蔗糖PBSS和171.2g/L蔗糖PBSS三步脱去甘油,用含20％犊牛血清PBS将胚胎清洗2遍后装管移植。共解冻18枝冻胚,16枚可用。可用胚率为84.2％(16/18)。采用非手术方法移植16头受体牛,5头妊娠产犊,移植妊娠率为31.5％(5/16)。     

小鼠胚胎嵌合的研究

选用昆白.CI_(57)及B/L_(615)三个品系小鼠,对其8细胞期(8C),桑椹期(M)和囊胚期(B)的全胚和半胚(半)进行聚合,培养和移植试验。8细胞期及桑椹期胚胎的聚合发育率显著高于囊胚期(P<0.05),全胚聚合的发育率显著高于半胚(P<0.05)。将同品系和不同品系的8细胞期,桑椹期和囊胚期胚胎嵌合移植给27只受体,9只妊娠,妊娠率分别为17％(1/6),40％(6/15)及33％(2/6),平均为33％(9/27),共产仔35只,其中不同品系胚胎的嵌合胚移植,产仔15只,4只为皮毛嵌合体。     

哺乳动物胚胎干细胞系建立方法的研究进展

本文概述了近10年来哺乳动物胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ES细胞)系建立的方法及其研究进展概况,并对目前家畜ES细胞建立方法研究中存在的问题及可能解决的途径进行了一些探讨。     

尿嘧啶和ATP对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响

[目的]探究尿嘧啶(Uracil)和三磷酸腺苷二钠盐(ATP)对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响。[方法]在体外成熟培养液中添加不同浓度的尿嘧啶和ATP,研究其对牛卵母细胞体外成熟及激活后孤雌胚胎发育能力的影响。[结果]在成熟培养液中添加50μg/ml尿嘧啶能够显著提高卵母细胞的成熟率、分裂率及孤雌胚胎囊胚率;在成熟培养液中分别添加0、250、500、750μg/mlATP,对卵母细胞成熟率影响不大,但添加500μg/ml ATP能显著提高激活后孤雌胚胎囊胚率。[结论]该研究为牛卵母细胞IVM研究提供了参考资料。     

应用Spindle-view观察哺乳动物成熟卵的纺缍体

应用Spindle—view对体外成熟培养20、22、24和26h的牛卵母细胞减数分裂纺锤体进行了观察；同时也对小鼠、家兔、山羊和猪等动物成熟卵母细胞的减数分裂纺缍体进行了观察。结果表明①在20-26h之间利用Spindle-view得到的牛卵纺锤体影像与极体的相对位置没有明显的变化；②纺锤体成像是否清晰可用于牛卵母细胞的质量监控；③Spindle—view适合于牛、家兔、小鼠和山羊成熟卵母细胞减数分裂纺缍体的观察。     

山羊骨髓MSCs体外向成骨细胞诱导和分化

以关中奶山羊骨髓间充质干细胞（MSCs）为对象，研究了体外诱导山羊MSCs向成骨细胞的分化。结果表明，山羊MSCs在地塞米松、β-磷酸甘油和抗坏血酸的作用下，从诱导的第4~5天开始，即可见有些MSCs体积逐渐增大，由梭形或多角形转变为立方形或卵圆形；随着诱导时间延长，立方形或卵圆形细胞不断增多，到第15天时，有较多的立方形细胞，且这种变化经历了从立方形向卵圆形转变的过程；第25天，可见卵圆形和方形细胞堆积，诱导分化率为90.2% ± 2.97%。说明其被诱导分化为成骨细胞表型，该类细胞呈茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色阳性。从而证明了山羊骨髓MSCs具有体外分化为成骨细胞的潜能，从而为利用该类细胞作为实验模型研究骨骼缺损修复等提供了科学依据。     

胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用

胚胎工程技术研究的目的,是对哺乳动物的胚胎在体外进行人为控制操作,让其继续发育,进而获得优良或珍稀动物个体,并应用这类技术进行基础研究和应用开发性研究。文章主要叙述了胚胎移植、胚胎冷冻保存、胚胎分割、体外受精、性别鉴定及控制、转基因动物、细胞核移植、胚胎干细胞和胚胎嵌合等胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用前景。