西农萨能奶山羊分娩期孕酮、雌激素、PGE_1和PGF_(2α)水平的变化

采用放射免疫分析法测定了10只西农萨能奶山羊分娩期外周血浆、脐静脉、羊水和尿水中孕酮(P)、雌激素(E)、前列腺素E_1(PGE_1)和前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))的含量,并对其分娩机理作了探讨。 产前72～12小时,外周血浆P水平迅速下降,与E水平逐渐上升呈极显著的负相关(r=-0.95,P<0.005);产前60小时至产出期,E和PGF_(2α)逐渐升高,二者呈极显著的正相关( r=0.93,P<0.005)。开口期,E、PGE_1和PGF_(2α)迅速增加,三者均于产出期达峰值,分别为2158±294、1397±398和744±181pg/ml(x±SE)。分娩后,P、E、PGE_1及PGF_(2α)均明显下降。 脐静脉血浆P、E、PGE_1和PGF_(2α)分别是胎羔排出时母体外周血浆含量的3.4、2.1、3.5和36.0倍,羊水中E、PGE_1和PGF_(2α)分别是该时期母体外周血浆含量的1.4、2.0和7.0倍。     

牛Oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株.我们以50～60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4基因全序列,全长为1 083 bp与GenBank公布的序列的同源性为99.4%.将其插入到逆转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,获得重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Oct4.鉴定正确后,通过Lipofectamine2000将其转导入包装细胞PT67,用含有G418的培养液进行抗性筛选,获得阳性细胞克隆.细胞上清经过RT-PCR、透射电镜及病毒滴度测定等方法鉴定,证实所包装病毒存在,其滴度值为8.83×107 cfu/mL.试验结果表明我们已获得携带牛Oct4基因的高滴度感染性逆转录病毒.     

波尔山羊胚胎移植应用研究报告

2002年10～11月,分4批使用阴道栓 FSH对36只供体波尔山羊进行超数排卵处理.在放人阴道栓的第12～15d,连续4d递减量早晚肌注FSH.34只供体羊发情、配种、采胚(反应率94.44%,34/36),平均采胚18.03枚(613/34),其中可用胚平均15.65枚(532/34),可用胚率86.79%(532/613),将532枚7日龄可用胚移植给277只受体关中奶山羊,妊娠217只,妊娠率78.34%.妊娠受体羊共产羔257只,每只供体平均获羔羊7.56只,供体羊采胚后,平均45 d发情配种,有34只妊娠,产羔65只,平均产羔1.91只.胚胎移植羔羊性别、初生重、发病率和波尔山羊自繁羔羊无显著差异(P＞0.05).本次波尔山羊胚胎移植产生明显的经济效益,技术成熟,可推广应用.     

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的 表达水平与生长行为

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4 d nanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示，MEF饲养层上培养4d的ES-D3 nanog基因含量高；nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低；而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示：不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d，集落形态仍然很规则，细胞间紧密，集落表面少见大细胞，AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞，集落界限清晰，AKP染色显示，集落大部分细胞呈阳性，少数的细胞集落为弱阳性，可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3，集落隆起不明显，集落界限不清晰，大部分集落形态不太规则，AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性，少数的细胞集落为全阴性，集落表面有较少的大细胞，集落周围有伸出的成纤维细胞。     

小鼠胚胎干细胞体外定向诱导分化成骨细胞

将小鼠5d龄ES-D3细胞源的类胚体(EBs)单细胞,按5×104/mL接种6孔细胞培养板,在DMEM基础培养基中使EBs单细胞贴壁培养。于第14!21天时,分别添加60%成骨细胞条件培养液(A组)、50μg/mL维生素C"50mmol/Lβ-磷酸甘油(B组)和50μg/mL维生素C"50mmol/Lβ-磷酸甘油"1μmol/L地塞米松(C组),并设不添加诱导剂对照组(D组)。第22天时用1%茜素红染色显示阳性细胞,计算成骨细胞诱导形成率,数据用方差分析和多重比较检验。结果表明,A组细胞增殖呈团状聚集,茜素红染色阳性细胞结节多分布于聚集的细胞群内及其边缘,成骨细胞诱导形成率为10.04%,与对照组比较,差异极显著(P<0.01);B组诱导分化的细胞分泌物形成网状结构,茜素红染色阳性细胞分布在这些网状结构中,成骨诱导形成率为7.43%,与对照组比较差异显著(P<0.05);C组茜素红染色阳性细胞分散而均匀,但未出现网状结构,成骨细胞诱导形成率提高至27.57%,与对照组比较差异极显著(P<0.01)。     

兔胰腺干/祖细胞的分离培养和鉴定

采取1～9日龄的实验仔兔胰腺,1 mg/mLⅣ型胶原酶消化,低糖DMEM培养.细胞铺满后进行传代20代以上冻存.对2～3代的细胞进行免疫组化染色,诱导向β细胞分化并进行高糖刺激胰岛素分泌.结果表明,兔的胰腺干/祖细胞具有较强的增殖能力;免疫组化染色表现为PDX-1、CK19、nestin和胰高血糖素阳性;分化诱导2 d后,双硫腙染色（DTZ）20%阳性,6 d后迅速增加到80%;高糖刺激诱导细胞具有胰岛素释放能力.通过免疫组化染色和诱导细胞胰岛素分泌实验证明分离的是兔胰腺干/祖细胞.首次报道兔胰腺干/祖细胞分离培养方法.     

ES-D3细胞nanog基因干扰载体的构建 及其干涉效果*

选择ES细胞nanog基因中4个区域合成寡聚核苷酸,构建了4个含有小鼠U6启动子的siRNA（小分子干涉RNA）表达载体并瞬时转染小鼠ES-D3细胞.半定量RT-PCR分析显示,所构建的4个siRNA表达载体中有3个可以在细胞内转录出siRNA或shRNA（短发夹RNA）,诱发RNA干涉（RNAinterference,RNAi）,能显著抑制目的基因nanog的表达;同时发现,干扰的ES-D3细胞生长48 h后,集落形态与未干扰细胞相比差别不大,但隆起不如后者明显,形态也不如后者规则,生长速度也较慢,AKP染色阳性,与未转染细胞相比没有差别.     

牛胚胎干细胞建系研究进展及存在问题

牛胚胎干细胞具有重要的生物学意义和广阔的应用前景。回顾了牛胚胎干细胞的研究进展，阐述了牛胚胎干细胞生物学特征与表面抗原标志、建系方法和技术路线，系统分析了影响牛胚胎干细胞分离克隆的各种重要因素，并对目前建系中所面临的主要问题进行了探讨。     

超数排卵对奶牛产奶量及繁殖能力的影响

用FSH+PGF_(2)对16头黑白花奶牛进行超数排卵处理。超排前4d和超排1～10d日均产奶量差异不显著(P>0.05)。超排采胚后1头因年老淘汰,1头冲胚时发现患有慢性卡他性脓性子宫内膜炎进行治疗未配,其余14头冲胚后发情正常,人工授精后均妊娠,和正常牛发情配种妊娠率无差异。超数排卵对奶牛产奶量及繁殖能力无影响。