低蛋白猪日粮添加氨基酸的研究

以密码子使用频率为指导进行低蛋白日粮氨基酸生物配比。低蛋白日粮中添加氨基酸能显著改善猪的生产性能。对照组与试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的日增重分别为 5 6 1 0 7g± 4 8 0 2g ,389 2 7g±2 7 31g ,5 2 6 79g± 33 72 g和 4 76 71g± 39 5 9g。结果表明 ,密码子的使用频率可以作为指导氨基酸生物配比的参考依据。     

新城疫野毒株与F48E9强毒株对不同抗体水平雏鸡的感染试验

应用新城疫野毒株与F48E9标准强毒株对母源抗体效价分别为8．50，6．00和4．00log2的雏鸡进行了攻毒试验。结果：新城疫野毒株的感染致死率依次为20％，100％和100％，F48E9标准强毒株的感染致死率依次为0，10％和100％，提示，在目前新城疫流行日益复杂的情况下，传统的高水平母源抗体已不能完全阻止新城疫强毒株的感染和发病。     

密码子指导下饲料氨基酸生物配比对雏鸡生产性能的影响

以NRC推荐的赖氨酸为基础 ,以各氨基酸对应的密码子使用频率的比率来确定饲料配方中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸和胱氨酸之间的生物配比。在基础日粮代谢能为 1 2 .2 7MJ/kg、粗蛋白 1 8.5 8%的条件下 ,研究氨基酸对雏鸡生产性能的影响。结果表明 ,试验Ⅱ组、试验Ⅰ组及对照组平均日增重分别为 (1 1 .3 4± 0 .5 4 ) g、(1 0 .5 2± 0 .77) g和 (9.6 3± 0 .6 8) g。2 1日龄肝组织中mRNA含量分别为 (471 1 .4± 1 3 1 .0 4 ) μg/g、(42 82 .4± 1 6 0 .0 3 ) μg/g和(40 4 2 .42± 1 2 0 .95 ) μg/g。     

减毒沙门菌介导防御素-3乳腺表达及对乳腺炎主要病原菌的抗菌效果

探讨减毒沙门菌介导的人HNP-3原前肽和前肽基因乳腺表达及其表达产物对牛乳腺炎主要病原菌的抗菌效果。构建人HNP-3原前肽和前肽基因的乳腺表达载体pEGFP-WAP-prepro-HNP-3和pEGFP-WAP-pro-HNP-3,电转化导入减毒沙门菌ΔcrpC78-1,构建重组菌ΔcrpC78-1（pEGFP-WAP-prepro-HNP-3）和ΔcrpC78-1（pEGFPWAP-pro-HNP-3）,重组菌分点注射到怀孕后20~22d母兔腹部乳腺分布区,收集兔分娩后不同时间的泌乳,Western-blot和荧光检测乳中HNP-3融合蛋白表达情况,ELISA检测乳中HNP-3融合蛋白的表达水平,常规方法分离乳腺炎主要病原菌,活菌计数法检测泌乳中HNP-3融合蛋白抑菌效果。结果显示,乳汁中分别在40 000和35 000处有prepro-HNP-3和pro-HNP-3融合蛋白阳性杂交信号,且在488nm处有黄绿色荧光;母兔在分娩后第5dHNP-3融合蛋白表达量最高,分别可达584μg/L和470μg/L,及至第25天表达量仍可达到277μg/L和213μg/L。活菌计数法结果表明分娩后第5d含prepro-HNP-3融合蛋白兔乳对牛乳腺炎主要病原菌大肠埃希菌、溶血巴氏杆菌、无乳链球菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌率分别为92.0%、54.8%、46.4%、48.8%、86.9%和74.9%;含pro-HNP-3融合蛋白乳的抑菌率分别为84.9%、46.5%、40.6%、40.4%、71.1%和58.4%。结果表明,减毒沙门菌能够介导人HNP-3融合蛋白基因在乳腺上皮细胞中定位表达,表达的preproHNP-3和pro-HNP-3具有较强的生物学活性,对牛乳腺炎主要病原菌具有明显的抑制作用,为乳腺炎的生物防控及生物源性抗菌肽的研究提供了参考。     

鸡新城疫病毒地方株F基因的扩增克隆与鉴定

应用RT-PCR技术对分离自发病鸡群的新城疫病毒(MDV)的F基因进行了扩增，结果得到0．81d)的扩增产物。将该扩增产物克隆至pMD18-T载体中，经酶切和PCR鉴定后，证明与设计的目的片段完全相符，从而用分子生物学的方法确定了常规实验室诊断的正确性。     

禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立

采用AIV灭活油乳苗（H9N2）对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清，取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法，经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶（HRP），制备禽流感酶标抗体（IgG—HRP），利用所提取的AI—IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot—ELISA试验操作步骤，采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度，以及各步反应时间等最佳反应条件，以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot—ELISA检测法。结果表明，所制备的AI高免血清HI效价为10log2；AI酶标抗体克分子比值为2．45；优化的Dot—ELISA各条件为：包被AI—IgG最佳稀释倍数为1：50；最佳封闭剂为1％牛血清白蛋白；AI酶标抗体最佳稀释倍数为1：100；待检抗原与2种抗体的感作时间均为0．5h（37℃）。优化后的检测方法可在2．5h内诊断结果。制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍，与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。     

减蛋综合症病毒六邻体蛋白基因的克隆与序列分析

设计了1对特异性引物,应用降落PCR法对减蛋综合症病毒(EDSV)六邻体蛋白基因进行了扩增。将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,经酶切和PCR鉴定后,初步证明了目的片段的正确性。进一步经核苷酸序列测定表明,所扩增的基因片段长度为2.74kb,共编码910个氨基酸,与由EDSV弱毒株(AA-2)全基因组的Hind酶切片段测序所得到的六邻体结构基因推测的氨基酸序列相比,有11处氨基酸发生了变异。     

减蛋综合征病毒基因组不同酶切图谱的比较研究

分别应用限制性内切酶HindⅢ、Xba Ⅰ、Soc Ⅰ、Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ对EDSV—gDNA进行单酶切以及以Hind Ⅲ为参照，选用适当内切酶进行双酶切，经对酶切图谱比较分析，以确定基因组中各酶切位点数及在Hind Ⅲ片段上的位置。结果表明：HindⅢ、Xba Ⅰ、Soc Ⅰ、Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ的酶切片段分别为9、2、2、5、4、4条，Hind Ⅲ Xba Ⅰ、Hind Ⅲ Kpn Ⅰ、Hind Ⅲ Sac Ⅰ、Hind Ⅲ BamH Ⅰ及Hind Ⅲ XEcoR Ⅰ分别为10、10、11、11和13条，为进一步研究禽类腺病毒的分子生物学特性和构建腺病毒表达载体奠定了良好的基础。     

鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的迁移与侵袭能力。结果显示,与相应阴性对照相比,转染TGFβ1过表达质粒可显著上调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,且使G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时增加细胞凋亡率,降低细胞的迁移与侵袭能力;转染TGFβ1干扰表达质粒可显著下调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著促进MDCC-MSB1细胞的增殖,G1期细胞减少、S和G2期细胞增加,同时降低细胞凋亡率,增加细胞的迁移与侵袭能力。结果表明,鸡TGFβ1可抑制MDCC-MSB1细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。     

实验性鸡马立克氏病免疫病理学研究 Ⅳ:外周血液淋巴细胞扫描电镜观察

本研究应用扫描电镜,对健康雏鸡和人工感染马立克氏病雏鸡的外周血液淋巴细胞进行了形态观察。结果观察到:健康雏鸡外周血液淋巴细胞的形态和哺乳动物的相似,但缺乏典型的绒毛型淋巴细胞;接种马立克氏病强毒后30～40天,外周血液淋巴细胞几乎全是光滑型淋巴细胞;鸡马立克氏病毒对鸡外周血液淋巴细胞有一定的损伤作用。