贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的污染及耐药情况,采集散养奶牛牛奶样本26份,运用细菌分离培养技术对样本进行细菌分离;PCR鉴定后测序;细菌药敏试验。结果:共分离鉴定沙门氏菌3株,分离率为11.5%(3/26);3株沙门氏菌对庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、阿莫西林(AMC)等耐药,对四环素(TET)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)等较为敏感。     

猪圆环病毒2型ORF1基因的克隆与原核表达

为了给猪圆环病毒病的诊断及防制提供科学依据,试验参考GenBank中猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2) ORF1基因序列,设计1对特异性引物,进行ORF1基因的PCR扩增,扩增出PCV2贵州株ORF1基因片段。扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET-30a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定后测序。结果表明,ORF1基因在pET-30a(+)载体中位置正确,pET30a-PCV2-ORF1原核表达质粒构建成功,转化至Rosetta菌,用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示PCV2-ORF1在pET-30a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子质量约为42 ku。重组蛋白主要以包涵体的形式表达,包涵体洗涤溶解后,采用Ni²⁺离子金属螯合亲和层析柱纯化蛋白,Western blotting分析结果表明,表达蛋白能和抗His标签的单克隆抗体反应。     

猪源多杀性巴氏杆菌的生物学特性与ToxA基因鉴定

对17株分离自猪萎缩性鼻炎临床症状猪群的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),进行了生物学特性试验与ToxA基因鉴定。基于Pm对甘露醇、卫茅醇、山梨醇、海藻糖的发酵能力和产生鸟氨酸脱羧酶的特性,鉴定出10株Pm多杀亚种(P.multocidasubsp.multocida);7株Pm败血亚种(P.multocidasubsp.septica)。根据PCR荚膜分型结果,有8株A型,9株D型。针对ToxA基因中的1 230 bp片段,采用T1/T4引物,4株Pm分离菌株被确定为产毒多杀性巴氏杆菌(ToxingenicP.multocida,T+Pm),占23.53%(4/17)。同时对17株Pm分离株进行药物抗性测定和分析得知,17株Pm对青霉素、先锋霉素Ⅴ、卡那霉素、庆大霉素、丙氟哌酸、氟哌酸、多黏菌素B和利福平的敏感率均在52.9%~100%,而对链霉素和氯洁霉素均不太敏感。     

贵州省畜禽源葡萄球菌和链球菌快速鉴定双重PCR方法的建立及应用

为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应条件优化,筛选出最佳引物浓度和退火温度;应用该方法对其他73株革兰氏阳性临床分离细菌进行检测,评价该方法的特异性;将培养的葡萄球菌和链球菌倍比稀释计数后鉴定检测方法的敏感性;应用该检测方法对贵州省部分畜禽葡萄球菌和链球菌临床分离样本进行检测。结果显示,所建立的方法最佳引物添加量均为1μL,最佳退火温度为56℃;其他73株供试菌株检测结果均无扩增条带出现,所建双重PCR方法具有较好的特异性;敏感性试验结果显示,葡萄球菌和链球菌敏感度分别达1.50 ng/μL和1.44 pg/μL;临床样本复检结果显示,73株临床分离细菌中葡萄球菌40株(54.79%)、链球菌33株(45.21%),与传统细菌分离鉴定方法的符合率为97.26%。本试验建立了一种特异、敏感和快速鉴定贵州省畜禽葡萄球菌和链球菌病原的双重PCR方法,为临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效技术。     

奶牛结核病防控与净化技术经验总结

结核病是由结核分枝杆菌引起的人畜共患传染病,是严重危害奶牛养殖的重要慢性传染病.结核分枝杆菌是1种纤细、平直或稍弯曲的杆菌,无芽胞,无运动,抗酸染色阳性.发病特征是动物机体某些器官发生结节性肉芽肿,继而在结节中心化脓,干酪样坏死,钙化或形成空洞.奶牛常见有肺结核、肠结核、淋巴结核、乳房结核等1.该病在人与奶牛之间传染率较高,严重危害人类健康,患病奶牛可引起严重的食品安全问题.多年来,笔者对该病的防控和净化技术进行了探索与生产实施,使贵阳市某存栏数为5 000多头的奶牛场2010-2013年间结核病的发生率为0,确保了牛奶的食品安全.现将经验总结如下,以期为同行控制该病提供参考.     

蛋鸡群主要传染病的免疫监测与结果分析

通过对贵州省某种禽场蛋鸡群进行的免疫监测和白痢检疫，结果表明，在3个被检的蛋鸡群中，鸡白痢的隐性感染率分别为6．9％(2／29)、19．3％(6／31)、0％(0／41)。22舍鸡群接种新城疫、禽流感疫苗的抗体效价较高，水平一致，分别达到1：90．510和1：193．207，100％获得免疫保护。在4个被检的蛋鸡群中，减蛋综合症的免疫效果较差，抗体效价低，分布不均匀。本文还对免疫效果与疫苗质量、鸡群健康状况的关系进行了讨论。     

一例禽白血病的病理学分析及qRT-PCR诊断

为查明贵州省惠水县某养殖场鸡发病死亡的原因,对送检鸡进行剖检和病理学观察,并应用qRT-PCR方法对病原核酸进行检测。结果：病(死)鸡肝脏肿大,有明显粟粒状细胞瘤增生,均匀分布于肝实质中,呈灰白色;组织病理切片观察发现大量圆形嗜酸性颗粒的髓细胞样瘤细胞和广泛的肝细胞空泡变性;病原核酸检测显示禽白血病病毒阳性,确诊为禽白血病病毒感染。     

安卡拉病毒贵州分离株Fiber2基因的克隆及序列分析

Fiber2蛋白是禽腺病毒血清4型(FAdV-4,又称安卡拉病毒)重要的免疫原蛋白,为深入了解FAdV-4贵州株Fiber2基因的遗传变异情况,本研究利用PCR技术扩增FAdV-4贵州晴隆株(GZ-QL)Fiber2基因,胶回收后将其连接至pMD19-T载体,转化入DH5α筛选阳性克隆质粒,经质粒PCR及双酶切鉴定后进行DNA测序,然后对测序结果进行生物信息学分析。结果显示,GZ-QL株Fiber2基因全长为1 440 bp,与四川分离的SCnj1601强毒株、北京分离的NIVD2强毒株Fiber2基因核苷酸同源性均为100.0%,与FAdV-4经典ON1株Fiber2基因核苷酸同源性为95.9%,两者位于相同进化分支。GZ-QL Fiber2蛋白共有33个氨基酸突变位点,其中,在第11～15位之间有5个氨基酸插入;蛋白质亲水性平均值为-0.031,其二级结构以无规则卷曲为主(占51.8%),无跨膜结构域或信号肽,抗原表位分布均匀,预测有8个优势抗原表位区域,且集中于N端。以上结果表明,FAdV-4贵州株GZ-QL Fiber2蛋白在禽腺病毒血清4型内相对保守且抗原性良好,具备成为优势...     

鸭圆环病毒与鹅细小病毒混合感染病例的实验室诊断

为确诊贵州省三穗县某规模化养鸭场40日龄花边鸭出现发病死亡的原因,剖检4只病死鸭并采集心脏、肝脏、脾脏病料,根据发病情况、临床症状、病理变化、细菌分离培养和相关病毒核酸检测进行诊断。结果:(1)病鸭主要以神经症状为主,鸭群发病4 d死亡率为17.24%;典型病理变化为腹膜呈灰白色、心脏有坏死灶、肝脏不同程度受损。(2)病料在不同营养琼脂培养基上培养24 h后均未见菌落生长。(3)病料中检测出鸭圆环病毒、鹅细小病毒特异性核酸片段,未检出禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒特异性核酸片段。结论:综合诊断养鸭场病例为鸭圆环病毒与鹅细小病毒混合感染。