贵州省猪传染性胸膜肺炎的抗体检测与病原鉴定

根据《贵州省畜禽疫病志》的资料，1992年以前，我省没有发生猪传染性胸膜肺炎的病例记载。近年来，随着畜牧养殖业的迅速扩大，生产方式向集约化与适度规模化发展．从国内外反复引种以及省内畜禽的频繁流动．在贵州省的一些种猪场中出现了传染性胸膜肺炎的临床病例。2005年8月，某种猪场2—4月龄的猪群发生一种疫病．主要表现咳嗽、生长停滞、体温在38～405。C之间。病情严重者喘气．甚至呈犬坐样，早晚呼吸困难症状加剧。4月龄以后临床症状逐渐缓解或消失。在疫病流行期间．曾采用氟苯尼考、土霉素等药物治疗效果不显著．遂将两头70日龄病猪送本实验室进行检查。剖检病变如下：心包与胸壁相粘连．心包膜增厚，不透明．心包腔内可见大量黄白色浑浊液体．含有乳糜样纤维素性渗出物。肺的膈叶出现多量实变区．心叶和尖叶分布较少，肺表面可见少量灰白色坏死结节和脓肿病灶。     

基于测序技术的贵州主要品种羊TLR2基因多态性分析

为了解贵州省不同品种羊TLR2基因序列的多态性特征,本研究以不同品种羊血液DNA为模板,对TLR2基因完整ORF进行PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,5种羊TLR2基因扩增长度均为2 355 bp。对贵州黑山羊、黔北麻羊、贵州白山羊、波尔山羊和湖羊5种羊TLR2基因进行种内比对结果显示,贵州黑山羊、黔北麻羊、波尔山羊种内TLR2基因序列保守,贵州白山羊种内A1732T位点存在多态性,湖羊种内在G1133A、T1162G、A1949G等位点存在基因多态性;种间比对结果显示,4种山羊有16个核苷酸位点存在多态性,其中有10个错义突变。4种山羊与湖羊进行比对结果显示,湖羊存在较多的多态性位点,其中有11处位点的差异导致氨基酸的变化。蛋白质结构预测分析显示,不同品种羊TLR2基因呈现的错义突变位点引起了其蛋白质二级结构和三级结构的变化,提示可能存在TLR2参与免疫相关信号通路水平的变化。本研究填补了贵州地方山羊品种TLR2基因多态性空白,为探究TLR多态性与羊疫病易感性关系提供基础研究资料。     

蛋白激酶C抑制剂及激活剂对鸭肠炎病毒增殖的影响

为进一步探究鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)的致病机理,试验采用鸭蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的抑制剂星形孢菌素(staurosporine,SP)和激活剂佛波醇(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)研究PKC/PKCI能否对DEV的增殖产生影响,为阐述DEV致病机理提供新的思路。用SP/PMA处理正常鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblast,DEF)后,实时荧光定量PCR方法检测不同时间段PKC/PKCI基因表达;用DEV病毒液感染SP/PMA处理的DEF后,收集不同时间段培养物,以Reed-Muench法计算DEV半数组织培养感染量(TCID50)值,实时荧光定量PCR方法检测分析DEV NP基因转录水平。结果显示,SP处理对宿主细胞PKC/PKCI基因表达水平无显著影响(P0.05);而PMA处理可极显著提高宿主细胞PKC基因表达(P0.01),但对PKCI基因表达水平无显著影响(P0.05);SP/PMA处理对DEV复制能力影响显著(P0.05;P0.01),且在感染前期可显著或极显著降低DEV NP基因的转录水平(P0.05;P0.01)。综上所述,SP和PMA对PKC、PKCI基因表达水平的影响效果不同,且都能有效抑制DEV增殖,本试验结果可为DEV的防控及其致病机理的研究提供基础资料。     

贵州省畜禽源葡萄球菌和链球菌快速鉴定双重PCR方法的建立及应用

为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应条件优化,筛选出最佳引物浓度和退火温度;应用该方法对其他73株革兰氏阳性临床分离细菌进行检测,评价该方法的特异性;将培养的葡萄球菌和链球菌倍比稀释计数后鉴定检测方法的敏感性;应用该检测方法对贵州省部分畜禽葡萄球菌和链球菌临床分离样本进行检测。结果显示,所建立的方法最佳引物添加量均为1μL,最佳退火温度为56℃;其他73株供试菌株检测结果均无扩增条带出现,所建双重PCR方法具有较好的特异性;敏感性试验结果显示,葡萄球菌和链球菌敏感度分别达1.50 ng/μL和1.44 pg/μL;临床样本复检结果显示,73株临床分离细菌中葡萄球菌40株(54.79%)、链球菌33株(45.21%),与传统细菌分离鉴定方法的符合率为97.26%。本试验建立了一种特异、敏感和快速鉴定贵州省畜禽葡萄球菌和链球菌病原的双重PCR方法,为临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效技术。     

鸡卡氏杆菌GZ2017株的分离与16 S rRNA序列分析

对贵州省某白羽蛋鸡养殖场患病鸡进行临床和实验室诊断,以期明确病因,有效控制感染。通过病理剖检观察、分离培养、染色镜检、生化试验和16SrRNA序列分析等方法对分离菌株进行鉴定。结果显示,该分离菌的培养特性、菌体形态特征、生理生化特征均与文献报道的卡氏杆菌相同。药敏试验结果表明,该分离菌株对米诺环素和万古霉素极度敏感,对多西环素和头孢哌酮高度敏感。16SrRNA序列分析结果显示,该分离菌与鸡卡氏杆菌(Gallibacterium anatis)同源性最高,在98.6%~99.2%之间,遗传进化树结果表明分离菌与Gallibacterium属的细菌同属于一个分支,与日本分离菌株在同一小分支上,属于鸡卡氏杆菌。本试验成功分离到1株鸡卡氏杆菌,并将其命名为GZ2017,试验结果为鸡卡氏杆菌病的治疗与防控提供理论依据。     

内源性禽白血病病毒的RT-PCR检测与基因序列分析

为了解贵州省是否存在内源性禽白血病病毒(ALV)感染情况,试验选取无明显ALV症状的送检病料,采用RTPCR方法对ALV进行扩增。结果:扩增出1条744 bp左右的目的条带。对扩增产物进行测序和基因序列分析,同源性分析结果表明:序列与E亚型ALV中的ev-1、ev-3株同源性最高(99.5%),与J亚型ALV中的HPRS-103株同源性较低(42%)。系统进化树中该序列与内源性ALV中的ev-1、ev-3株属同1个分支,亲缘关系最近,说明其属于内源性ALV。     

猪流行性腹泻研究进展

文章通过对猪流行性腹泻的发展史、病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和防治进行概述,为猪流行性腹泻的科学防控提供参考。     

山羊痘病毒ITR基因片段的克隆与序列分析

应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y和B株ITR基因片段,插入pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组载体经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上8株羊痘病毒相应序列进行同源性分析。结果经PCR扩增,4株病毒均可得到一条均一的DNA片段,该片段可被内切酶AluⅠ特异酶切,而且该PCR的DNA模板最小检出量为24.40pg。经测序,该基因片段长度为289bp;序列比较发现,4株病毒ITR片段与GenBank上2株山羊痘病毒的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100%,与3株绵羊痘病毒分别为98.2%和96.5%,与3株牛疙瘩皮肤病病毒为98.2%～99.3%和96.5%～97.7%。这表明ITR基因片段在羊痘病毒属中较为保守,可以针对ITR基因建立羊痘病毒的PCR检测方法。     

复合益生菌对早期断奶仔猪生长性能和免疫水平的影响

为研究酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌对早期断奶仔猪免疫水平的影响,试验选取（杜×长×大）三元杂交断奶仔猪80头,分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组20头,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加0.10%、0.20%、0.30%复合益生菌,对照组饲喂基础日粮,以期评价其生长性能、血液生化、血清细胞因子和肠道黏膜分泌性球蛋白A（SIgA）水平。结果表明,试验Ⅱ、Ⅲ组末重极显著高于试验Ⅰ组和对照组（P<0.01）;试验Ⅲ组平均日增重极显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组（P<0.01）,试验Ⅲ组平均日采食量显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组（P<0.05）,对照组、试验Ⅱ组腹泻率均极显著高于试验Ⅰ、Ⅲ组（P<0.01）;试验组中的乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP）含量均高于对照组,总蛋白（TP）含量低于对照组,差异均不显著（P>0.05）;试验组中尿素氮（BUN）含量均显著高于对照组（P<0.05）,试验Ⅱ、Ⅲ组谷草转氨酶（AST）含量显著高于试验Ⅰ组和对照组（P<0.05）。试验0 d,试验组白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平与对照组相比差异不显著（P>0.05）;试验20 d,试验Ⅱ、Ⅲ组中IL-6水平极显著高于试验Ⅰ组及对照组（P<0.01）,IL-1β和TNF-α水平与对照组相比差异不显著（P>0.05）;试验40 d,试验组IL-1β水平均高于对照组（P>0.05）,IL-6和TNF-α水平均极显著高于对照组（P<0.01）。试验组中空肠黏膜SIgA水平极显著高于对照组（P<0.01）;十二指肠和回肠黏膜SIgA水平均显著高于对照组（P<0.05）,盲肠黏膜SIgA水平低于对照组,差异不显著（P>0.05）。说明不同含量酿酒酵母菌-枯草芽孢杆菌复合益生菌均可有效提高断奶仔猪的生长性能,缓解早期断奶仔猪应激反应,增强断奶仔猪的免疫功能。