单克隆抗体在猪瘟诊断上的应用

猪瘟单克隆抗体以其敏感性高、特异性强、能够识别病毒抗原结构的微小差异,同时单抗特有的理化同质性使抗原抗体反应结果便于质量控制,利于标准化和规范化等优点,在猪瘟的诊断以及强、弱毒鉴别诊断中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就猪瘟单克隆抗体及其在猪瘟诊断中的应用进展作一综述。     

基因C型鸭甲肝病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析

为确定发病鸭场的致病原,并掌握该致病原的遗传进化特征,进行了临床病料的RT-PCR检测、病毒分离与鸭胚病变特征观察、分离毒株半数致死量(ELD50)测定、动物回归试验、VP1基因序列分析等研究。结果显示:临床病料样品经DHAV-C特异性引物检测为阳性,病料样品可引起10日龄鸭胚规律性死亡以及肝脏肿大、出血等特征性病变,分离毒株对鸭胚的ELD50为10^-6.32/0.1mL,分离毒株对雏鸭的致死率达100%,并可引起雏鸭精神沉郁、运动障碍、肝脏肿大出血等典型症状,分离毒株VP1基因序列与GenBank中登录的DHAV-C VP1基因的同源性在96.5%~100%之间,遗传进化关系中分离毒株与DHAV-C各毒株处于同一个分支,而与DHAV-A、DHAV-B处于不同分支。试验结果为研制针对DHAV-C流行毒株的诊断试剂和新型疫苗奠定了基础。     

一株鸭星状病毒的分离鉴定

为对发病鸭场找到致病原,并对病原分离鉴定,丰富病原分子流行病学以及为新型诊断试剂和疫苗的研究奠定基础。通过对发病鸭场病鸭临床症状和病理变化观察,鸭胚传代分离培养及一步RT-PCR检测和扩增序列比对分析,最终确定该鸭场发生鸭病毒性肝炎,病原为鸭星状病毒。鸭星状病毒感染导致鸭肝炎的报道不多,但确是导致鸭肝炎的病原之一,应该引起对该病毒的重视。     

猪乙型脑炎病毒间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的研制及其应用

为研制一种快速猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒,本研究参照已发表的JEV（乙型脑炎病毒）基因组序列,RT—PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白,以该蛋白作为诊断抗原,研制了检测乙型脑炎病毒抗体的间接ELISA（酶联免疫吸附试验）诊断试剂盒。该试剂盒与其它7种常见猪病病毒（圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒、细小病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒）的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5％,批间重复性试验的变异系数小于10％;与HI（血凝抑制试验）相比,符合率、敏感性和特异性分别为83．1％、84.3％和80．0％。本研究制备的重组蛋白具有良好的反应活性,以其作为包被抗原研制的JEVE—ELISA诊断试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断试剂盒。     

猪伪狂犬病毒gD蛋白的截短表达与PPA—ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种快速的猪伪狂犬病毒抗体检测方法,本研究参照已发表的PRVSA株基因组序列,PCR扩增了长约1070bp的gD基因片段,将目的片段定向克隆到pET30a原核表达载体,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,建立了检测猪伪狂犬病毒抗体的PPA—ELISA检测方法。该方法与其他7种常见猪病病毒（CSFV、PPV、PRRSV、JEV、PCV－2、PEDV、TGEV）的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5％,批间重复性试验的变异系数小于10％;与IDEXXgD-ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为92．0％、95．1％和88．1％。本研究建立的PRVgD-PPA—ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV的免疫猪群抗体监测、快速诊断和PRV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。     

间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用

间接ELISA以其灵敏、特异、简单、快速、稳定、高通量及易于操作等优点,在猪瘟免疫猪群抗体水平监测、猪瘟的快速诊断与流行病学调查中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就间接ELISA方法及其在猪瘟诊断上的应用概况做一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

蛋白质的糖基化作用及其在生物制药中的应用

糖基化是生物体一种最为常见且最主要的蛋白质翻译后修饰方式,对蛋白质性状及其功能的影响具有重要的生物学意义。近年来,随着糖生物学与糖基化工程的发展,已有越来越多的药物应用于临床。文章概括了蛋白质糖基化修饰的种类及糖基化修饰对蛋白质特性的影响;在此基础上,总结了近年来蛋白质糖基化工程在生物制药中的发展与应用。蛋白质糖基化工程作为一种新型的改良蛋白质性质的手段,必然会在蛋白质的改造中发挥越来越重要的作用。     

核酸适体及其在疫病诊断中的应用

核酸适体是采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体.因其具有亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等优点,逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已成功应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种疫病诊断技术平台,显示出了良好的应用前景,在未来的疫病诊断中将发挥越来...     

我国猪口蹄疫免疫现状及疫苗免疫效果的影响因素分析与对策

强制免疫工作作为当前防控猪口蹄疫的有效措施,是避免和减少口蹄疫疫情发生的关键,笔者就近10年来我国猪O型口蹄疫强制免疫后的免疫现状与特点进行了总结与概述,并对影响猪口蹄疫疫苗免疫效果的因素进行了分析,进而提出了提高疫苗免疫效果的对策,对掌握我国猪O型口蹄疫的免疫现状,及时发现疫情隐患和疫病防控工作中的薄弱环节,为优化猪口蹄疫免疫程序和更好地科学防控猪口蹄疫提供技术保障。     

植酸酶对鲤鱼生长及磷利用率的影响

选用300尾体重为50 g左右的鲤鱼鱼种,随机分为5组:对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组。对照组饲喂基础饲料,Ⅰ组饲喂每千克添加1500 U植酸酶的基础饲料,Ⅱ组饲喂每千克添加3000 U植酸酶的基础饲料,Ⅲ组饲喂每千克添加4.5 g Ca(H2PO4)2的基础饲料,Ⅳ组饲喂每千克添加8.9 g Ca(H2PO4)2的基础饲料。结果显示:饲料中添加3000 U/kg和1500 U/kg植酸酶显著地促进了鲤鱼生长,降低了饲料系数,提高了饲料中磷的利用率。与对照组相比,3000 U/kg和1500 U/kg植酸酶组鲤鱼的增重率分别提高61.06%和52.81%,鲤鱼对饲料中磷的表观消化率分别提高65.63%和61.65%,粪磷含量分别下降24.58%和22.88%。本试验表明:植酸酶可以显著地促进鲤鱼的生长和提高磷的利用率。