利用总蛋白评价猪肺炎支原体HN0613株免疫原性的研究

猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）是一类无细胞壁的原核微生物,体外培养难度大,其滴度一般通过颜色变化单位（colour change unit,CCU）来反映,但该方法检测值跨度较大,无法进行精准定量。为了更加准确地评价Mhp的免疫原性,对Mhp HN0613株的总蛋白进行检测,发现同等CCU滴度水平的不同Mhp样品总蛋白含量之间存在一定的差异;通过对Mhp HN0613株的CCU滴度水平、总蛋白含量和动物实验结果进行对比分析,发现在相同CCU滴度水平条件下,Mhp HN0613株的总蛋白含量与其免疫原性呈一定的正相关性。为了验证以总蛋白含量作为辅助CCU滴度评价Mhp免疫原性方法的可行性,对Mhp HN0613株进行静置培养;48 h后其CCU滴度水平为5×10⁹ CCU/mL,且总蛋白含量达到最高,为0.030 mg/mL,高于同等CCU滴度水平、培养42 h样品的总蛋白含量;根据Mhp HN0613株的总蛋白含量与其免疫原性的相关性,表明培养48 h样品具有更好的免疫原性。动物实验结果显示,培养48 h的Mhp HN0613株样品具有更好的间接血凝试验（indirect hemagglutination assay,IHA）检测结果,证明Mhp总蛋白检测法可作为一种辅助CCU滴度评价Mhp免疫原性的可靠方法。     

猪流行性腹泻病毒单克隆抗体8A3的CHO细胞瞬时表达与稳转细胞池构建

为实现猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)的体外高效表达,首先利用基因工程技术获得了PEDV鼠源mAb 8A3的轻链和重链序列,然后构建真核表达载体pCHO1.0-8A3-H-L,再利用CHO细胞对mAb 8A3进行瞬时表达,最后经稳定转染以获得稳定表达8A3的CHO细胞池。结果显示,CHO细胞表达的mAb 8A3在免疫印迹和间接免疫荧光分析中均可特异性识别PEDV,且具有正确的IgG抗体构型;且CHO细胞表达的mAb 8A3可以中和G2a、G2b和G1基因型PEDV。实现了PEDV mAb 8A3的CHO瞬时转染表达,并获得了稳定表达8A3的CHO细胞池,为PEDV mAb稳定表达细胞系的筛选奠定了基础,同时为PEDV的诊断和治疗提供了新型基因工程抗体材料。     

犬腺病毒研究进展

<正>犬腺病毒(Canine adenovirus, CAV)分为2个血清型,犬腺病毒1型(Canine adenovirus 1,CAV-1)主要引起犬急性败血性肝炎,熊和狐狸脑炎;犬腺病毒2型(Canine adenovirus 2,CAV-2)主要引起犬科动物传染性喉气管炎和传染性腹泻等。CAV是目前已经发现的哺乳动物腺病毒属中致病性强、感染动物广的双股DNA病毒之一,该病毒在全世界范围内普遍存在,     

猪圆环病毒2型IgM抗体间接ELISA的建立

猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症的重要原发性病原,其感染的早期检测有助于及时采取防控措施。以重组衣壳蛋白(Cap蛋白)作为包被抗原,通过对反应条件的优化,建立了PCV2 IgM抗体间接ELISA,其最适抗原包被浓度为1.25 μg／mL,最适血清稀释度为1∶100,临界值为0.35。该检测方法与其他5种常见猪疫病阳性血清无交叉反应,特异性良好。批内、批间重复试验的变异系数均在2%~6%,重复性好。对100份临床样本的检测结果表明,该检测方法与国外同类试剂盒相比,敏感性为90.3%,特异性为92.8%,总符合率为92%。试验结果表明,所建立的PCV2 IgM间接ELISA特异性好和敏感性高,适用于PCV2感染早期的流行病学调查。     

猪伪狂犬病毒和猪细小病毒双重PCR方法的建立及初步应用

目的本研究旨在建立一种适用于临床样品和动物源性生物制品中猪伪狂犬病毒和猪细小病毒同时检测的双重PCR技术。方法针对猪伪狂犬病毒(PRV)的gE基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守区域分别设计引物。结果经条件优化后,所建立的双重PCR方法能特异性地检测出样品中的PRV(581bp)和PPV(202bp)。结论本方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,适用于临床样品中对PRV和PPV的同时检测,也可用于猪源性生物制品的检测。     

高密度悬浮转染方式高效获得重组杆状病毒

为了提高低代次重组杆状病毒的病毒滴度和获得足量低代次种子批,以最大程度满足产业化生产的需求,本研究以表达猪细小病毒(PPV)衣壳蛋白VP2的重组杆状病毒质粒(Bacmid)为研究对象,分别转染贴壁Sf9细胞和高密度悬浮ExpiSf9细胞.通过重组杆状病毒滴度测定、SDS-PAGE、Western blot以及血凝效价测...     

非洲猪瘟病毒K145R蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫诊断学试剂,利用大肠杆菌系统表达ASFV重组K145R蛋白,制备并鉴定K145R蛋白单克隆抗体.结果显示,成功构建pET28a-K145R表达载体,表达得到大小约为17 ku可溶性的重组K145R蛋白.Western blot分析证实,重组K145R蛋白与ASFV阳性血清有良好的反应...     

猫杯状病毒分离鉴定及其VP兽医临床1基因序列分析

为了解我国猫杯状病毒(FCV)流行情况,于2019年1月～3月从京津地区4家宠物医院收集并检测眼鼻肛拭子297份,FCV、猫疱疹病毒1型和猫泛白细胞减少症病毒阳性率分别为15.49％、30.98％、30.64％.病原学调查结果显示,未免疫的小于1岁幼猫对FCV更易感.将FCV单纯阳性病料接种于F81细胞进行病毒分离,通...     

新生水貂肠炎病毒母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果研究

本研究旨在探索水貂肠炎病毒（mink enteritis virus,MEV）的母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果。以免疫母貂所生仔貂为研究对象,采集21、30、45、60日龄仔貂血清,测定水貂病毒性肠炎母源抗体HI效价（MEV HI）;选取25只47~52日龄健康水貂接种制备MEV基因工程亚单位疫苗,免疫前后14 d采血测定MEV HI效价;免疫后14 d进行水貂肠炎病毒攻毒临床症状观察,并测定粪便HA效价;攻毒后14 d对濒死和存活水貂安乐死,采集十二指肠、空肠和回肠进行病理组织学观察和免疫组化检测。结果显示,免疫母貂所产仔貂的MEV HI效价随着日龄的增加逐渐降低,在21日龄时较高,45日龄时少部分仔貂MEV HI效价<1：32,60日龄时大部分仔貂HI效价≤ 1：4;使用制备合格疫苗免疫后14 d对照组水貂的MEV HI效价均不高于1：4,免疫组MEV HI效价升高至1：64~1：512;攻毒保护试验表明,免疫组水貂100%抵抗水貂肠炎病毒强毒的攻击,水貂的精神、饮食、粪便等均未见异常,且攻毒后粪便HA效价为1：8~1：16;病理组织学和免疫组化检测结果表明,MEV基因工程亚单位疫苗能够很好地阻止病毒在肠黏膜上皮细胞的复制和对肠黏膜上皮细胞的损伤。因此,免疫母貂所生仔貂21日龄时体内抗体效价最高,制备的疫苗免疫50日龄左右的水貂时能够突破母源抗体干扰并产生高水平的抗体,能够抵抗水貂肠炎病毒强毒株的攻击。