猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立

为了解猪体内细胞免疫应答机制,本研究建立猪细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系.以五指山小型猪cDNA为模板,扩增IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的基因保守区,构建相应的重组质粒,并将其作为标准品构建标准曲线.结果显示,各标准曲线的相关系数r值均大于0.990,扩增效率为90%～105%;该检测方法的敏感性较高,IL-4检测下限为1 copies/μL,IL-2、IL-10及IFN-γ检测下限达为102copies/μL;重复性较好,批内重复试验与批间重复试验变异系数均小于5%.本研究为病毒感染后猪体内免疫应答等研究提供方法.     

犬链球菌感染研究进展

犬链球菌(Streptococcus canis)属兰氏G群链球菌,通常分布于动物特别是犬和猫的皮肤和黏膜,可导致犬、猫的败血症、关节炎等疾病,偶尔引起奶牛的乳房炎.人类感染犬链球菌,可发生败血症、脑膜炎等,但人的感染并不多见.     

猪圆环病毒2型Cap蛋白及传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的VLPs自组装表达与免疫效力评价

为了利用同一重组大肠杆菌实现不同种动物疫病来源类病毒样颗粒(virus like particles, VLPs)的高效组装表达,试验将编码猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白的核苷酸序列分别克隆至pET28a-Rcodon载体中,并分别转化至改造的BL21(DE3)△lpxM tig⁺感受态细胞中,利用纳米粒度电位仪及透射电子显微镜分析目的蛋白表达后的胞内组装情况,并用纯化后的抗原蛋白制备的疫苗免疫动物进行免疫效力评价。结果表明：PCV2 Cap蛋白和IBDV VP2蛋白的可溶性表达水平较优化前对照组均分别提高90%左右,且目的蛋白在胞内高效自组装形成了VLPs,并排列呈均一的晶格结构;含VP2抗原的亚单位疫苗可提供100%的保护效果,含PCV2抗原的亚单位疫苗的抗体水平较高,显著高于阴性对照组纯化后的抗原蛋白制备的疫苗(P<0.05)。说明PCV2 Cap蛋白和IBDV VP2蛋白在BL21(DE3)△lpxM tig⁺感受态细胞中均可实现高效可溶性表达与细胞内VLPs自组装,且免疫原性良好...     

表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺研究

为建立一套表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺,提高反应器上猪瘟病毒E2蛋白的表达量,以商业化培养基为基础,通过对关键营养组分添加量的DOE试验设计优化,获得一种组合补料配方,并在3 L反应器上对补料方式进行优化,以最大限度提高细胞密度。进一步在反应器上摸索了通气策略,以精确调控猪瘟E2重组杆状病毒培养过程的营养代谢平衡,解决副产物乳酸和氨过度积累导致细胞活力下降的问题。首次使用半连续补料工艺与渗透压动态平衡相结合的补料策略以及定向调节通气的工艺模式,使猪瘟病毒E2蛋白的表达量由130 mg/L增加至520 mg/L,提高了3倍。将3 L反应器工艺在100 L反应器上进行了连续3个批次的验证,结果猪瘟病毒E2蛋白的表达量均大于500 mg/L,收获猪瘟E2蛋白制备的疫苗抗体均在2周后转阳,且抗体水平持续上升,接种后8周抗体阻断率仍维持在80%左右。综上,3 L反应器工艺能够稳定放大至100 L反应器,建立了表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒100 L反应器工艺,且100 L反应器上重组蛋白的表达量稳定、免疫原性良好。     

犬腺病毒感染

历史犬腺病毒引起的传染病包括传染性犬肝炎、传染性犬喉气管炎和狐脑炎等。1947年,Rubarth首次确认传染性犬肝炎。1959年,Kapsenberg获得分离病毒,并证明犬肝炎和狐脑炎是由同一种腺病毒引起,称为犬腺病毒Ⅰ型(CAV-1)。1962年,Pitchfield等在加拿大一次犬喉气管炎爆发中分离到一种犬腺病毒,即A-26毒株,称为犬腺病毒Ⅱ型(CAV-2)。两型可用血凝抑制试验和中和试验相区别。     

犬瘟热病毒MD-77株在Vero细胞上增殖规律的观察

犬瘟热病毒ＭＤ┐７７株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖规律的观察遇秀玲田克恭吴娜李俊梅隋丽华任晓明（军事医学科学院实验动物中心,北京丰台１０００７１）犬瘟热病毒（ＣａｎｉｎｅＤｉｓｔｅｍｐｅｒＶｉｒｕｓ,ＣＤＶ）是对我国养犬业危害较大的病毒之一。近年来,我们从临...     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性、坏死，空泡化、合胞体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体，８天可见核内包涵体，核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比，ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖后的毒力较高，除不同毒株间可能存在差异外，培养温度的高低亦是原因之一。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的最佳增殖条件是在３３℃培养８～１２天。