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应用RT-PCR方法扩增出番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的σC基因,通过XhoⅠ+HindⅢ双酶切后把该基因插入到经过同样双酶切的穿梭质粒pShuttle-CMV载体中。重组穿梭载体经过双酶切和PCR鉴定后进行测序,序列测定正确,同源性为99.8%。将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞后获得重组腺病毒。PCR和RT-PCR鉴定的结果证明σC蛋白基因已成功插入到重组腺病毒载体中。 相似文献
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为建立同时检测兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的双重PCR检测方法,本研究根据金黄色葡萄球菌的nuc基因和支气管败血波氏杆菌的fimN基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,成功建立兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法。该方法对兔多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌和魏氏梭菌的检测结果为阴性;能够检出5pg的金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的基因组DNA;与单重PCR检测方法的符合率为100%。说明本试验建立的双重PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和准确性,为兔金黄色葡萄球菌和支气管败血波氏杆菌的鉴别诊断提供了有效的技术手段。 相似文献
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福建白兔Myostatin(MSTN)基因的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为掌握福建白兔负向调控骨骼肌生长发育的肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因分子基础,应用RT-PCR和RACE技术从肌肉组织总RNA中克隆出福建白兔MSTN基因的cDNA序列并进行分析。结果表明,该基因序列全长1 551bp(GenBank登录号:KX084386),其中5′非翻译区136bp,3′非翻译区287bp,1128bp的开放阅读框,编码375个氨基酸,MSTN蛋白在第97~768核苷酸处编码的氨基酸存在1个TGF-β前肽超家族结构域,在第841~1 125核苷酸处编码的氨基酸存在1个TGF-β家族结构域。序列分析表明:福建白兔与穴兔、人、猪、家鼠、马、牛、绵羊、鹿、狒狒、猩猩、猴的MSTN核苷酸序列同源性分别为99.9%、92.8%、94.4%、86.9%、95.2%、89.1%、91.0%、90.3%、95.9%、96.4%、95.9%。研究结果为进一步开展福建白兔MSTN基因的结构、表达以及分子育种等相关研究提供了基础数据。 相似文献
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应用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒σC基因,分析σC蛋白的抗原性。根据已登录的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) NP03株S1基因序列,针对σC基因设计并合成1对特异性引物,用RT-PCR扩增该基因,并将此片段克隆到原核表达载体 pET-30a (+)上,将序列正确的重组质粒命名为 pET-NDRV-σC ,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1.0 mmol·L -1 IPTG 37℃诱导表达。结果显示,RT-PCR扩增得到966 bp的目的片段;表达产物经 SDS-PAGE分析,获得了与预期相符的约41.3 ku的条带,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting 分析显示,重组蛋白能与 NDRV 阳性血清发生反应。本试验首次应用原核表达系统获得NDRV σC蛋白,并证明其具有免疫反应性。 相似文献