荧光实时定量PCR技术及其在水产养殖研究中的应用

荧光实时定量PCR技术是近年来快速发展起来的一门新技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)和PCR技术的有机结合。与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高、能较准确定量等特点。本文综述了荧光实时定量PCR技术的基本原理及几种广泛应用的荧光化学方法,并概述了荧光实时定量PCR技术在水产养殖研究领域的应用现状,并对荧光实时定量PCR技术的应用前景进行了展望。     

鲻鱼在饥饿状态下的耗氧率和排氮率与其体质量及水温变化关系研究

研究了南海近海野生鲻鱼(Mugil cephalus)在饥饿状态下的呼吸和排泄与其体质量及水温变化的关系。实验鲻鱼捕自大亚湾近海海域,实验方法采用成熟的二因素五水平中心复合实验设计和响应曲面法,实验设计5组梯度水温,分别为16℃、20℃、24℃、28℃和32℃,同时,鲻鱼按体质量的均值设计5组,分别为(5.66±0.38)g、(9.74±0.58)g、(13.58±0.37)g、(18.37±0.44)g和(27.68±0.38)g,研究野生鲻鱼在实验条件下的耗氧率、排氮率和氧氮比值[n(O):n(N)]的变化规律。结果表明,体质量越小的鲻鱼,在水温越高的环境中对耗氧率及排氨率影响越显著,且体质量对耗氧率及排氨率的影响作用明显大于水温的作用。不同体质量鲻鱼的n(O):n(N)比值为10.15~19.52,在水温24℃条件下,体质量(27.68±0.38)g实验组氧氮比值最大,说明其体内蛋白质与脂肪混合代谢机能旺盛,生长速率快。因此,可以确定24℃左右为鲻鱼生长的最适水温。     

内源钙或磷测定方法的研究进展

钙或磷是动物必需的常量矿物元素,但是过量的添加钙或磷会增加饲料成本,同时过量磷的排泄还会造成环境污染问题。钙或磷的真消化率能够反映动物利用钙或磷的真实情况,因此内源钙或磷的测定是测定钙或磷真消化率的前提和基础,而同位素稀释技术、差量法、体外法、梯度回归法等是目前测定内源钙或磷和真消化率的主要方法。     

尼罗罗非鱼Foxp1a/b的cDNA克隆及表达模式研究

为探讨低等脊椎动物Foxp1与免疫细胞活化及机体雌激素水平的相关性,本研究首次分离克隆了尼罗罗非鱼 (Oreochromis niloticus) Foxp1的开放阅读框序列,并通过real-time PCR对其mRNA表达水平进行检测。结果显示,尼罗罗非鱼具有两种不同基因编码的Foxp1分子,分别命名为OnFoxp1a与OnFoxp1b;OnFoxp1a为1710 bp,由15个外显子编码569个氨基酸,OnFoxp1b为2040 bp,由16个外显子编码679个氨基酸;OnFoxp1a/b均含有Foxp亚家族的特征性结构,即锌指结构、亮氨酸拉链样结构和叉状螺旋结构;与OnFoxp1a相比,OnFoxp1b与高等脊椎动物Foxp1具有更近的亲缘关系。Real-time PCR检测结果显示,OnFoxp1a/b几乎在所有组织中均有表达,OnFoxp1a在精巢中有高水平表达, OnFoxp1b在心脏中有高水平表达,同时OnFoxp1b在免疫相关组织如鳃、脾脏、肾脏、肠等均有中等水平表达;淋巴细胞多克隆刺激剂PHA、PMA、LPS刺激尼罗罗非鱼外周血单个核细胞（PBMC）,结果显示,50 μg/mL PHA和50 ng/mL PMA分别刺激6、12、24 h均显著增强OnFoxp1b的表达 (p＜0.05),20 μg/mL LPS刺激后,OnFoxp1b的表达出现先降低后升高的趋势 (p＜0.05);而OnFoxp1a的表达除50 μg/mL PHA 刺激24 h后有所升高,其余均无显著变化;雌激素处理6月龄雄性尼罗罗非鱼48 h,OnFoxp1a/b在肠、肾脏中的表达显著上调 (p＜0.05),而脾脏中无显著变化 (p>0.05)。综上所述,低等脊椎动物硬骨鱼类两种不同基因编码的Foxp1a/b均为哺乳动物Foxp1的同源分子,但其序列、结构特征、表达模式迥异,提示其功能发生歧化;同时两者的表达与淋巴细胞活化及机体雌激素水平密切相关。     

海带夏苗培育中配子体死亡和小孢子体畸形的原因反防治

<正> 长期以来,在人工低温培育海带夏苗中,病烂甚多。其中以育苗前期的配子体死亡和小孢子体畸形(即变形烂)危害最大。病烂表现为配子体转化时细胞壁增厚,原生质外移,被粘液包围,进而空壳死亡,接着就是刚转化的小孢子体空壳,细胞膨大或排列不齐,发育畸形,而烂掉。这种病烂严重地影响了出苗质量和数量,也就是海带养殖的苗种供应。因此,找出病烂原因,进行防治,是急待解决的实际问题。     

应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究

以皱纹盘鲍脓足病致病病原－ － 创伤弧菌为抗原,制备兔抗血清,抗体纯化后以辣根过氧化物酶标记,建立检测创伤弧菌的双抗夹心ＥＬＩＳＡ 检测法。结果表明,双抗夹心ＥＬＩＳＡ 法有较高的灵敏度,可检出含菌１０４ 个／ｍｌ 的菌悬液。与创伤弧菌对照菌株有明显的阳性反应不与副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、河流弧菌等８ 株对照菌株产生影响检测结果的交叉反应。应用该法检测３０ 份病鲍样品,阳性检出率为６６ ．７ ％ 。     

高邮湖大规格罗氏沼虾网围养殖技术及效益分析

正罗氏沼虾又名马来西亚大虾、淡水长臂大虾等,为世界上最大的淡水虾类之一,具有个体大、食性杂、生长快、适应能力强、肉味鲜美等优点。高邮市罗氏沼虾养殖面积1万hm~2左右,占全国总产量的1/4以上,为高邮市水产养殖的主导产业。     

中国对虾体内维生素C的含量及其变化

维生素C又名抗坏血酸,它是对虾生长、代谢及维持正常生理功能所必需的有机化合物。对维生素C的需求量则因对虾的个体大小、生长率、成熟度和环境因子的不同而异。缺乏维生素C不仅影响对虾蜕皮和伤口愈合,而且还会导致患病或降低抗御不良环境的能力。到目前为止,我国养殖对虾配合饵料中所添加的维生素C数量多参照国外虾类的标准,尚无切合中国对虾特点的添加标准,这对我国的     

河蟹套养南美白对虾养殖技术

正河蟹是我国重要的淡水蟹类,其肉质细嫩,味道鲜美,营养丰富,但随着河蟹养殖面积和产量的增加,河蟹市场价格波动较大,经常出现价格低迷的情况,为了提高养蟹池塘的利用率,提高池塘养蟹的经济效益,迫切需要探索河蟹套养的新模式。南美白对虾是当今世界养殖产量最高的三大虾类之一,其生长快,抗病能力强,肉质鲜美,加工出肉率可高达67%,适温适盐范围都较广,是一种优良的淡化养殖品种。2015年笔者在江苏省宿迁市水产科技示范园有限公司养殖基地探索了蟹池套养南美白对虾新模式,在既不影响河蟹养殖,也不需要     

60Co-γ射线辐射对寒地粳稻种子活力的影响

为探索60Co-γ射线辐射对寒地粳稻种子活力的影响,采用3个剂量(220 Gy、250 Gy、280 Gy)对6个粳稻品种(V1～V6)进行辐射处理,分析不同品种种子活力的变化.结果 表明,在0～280 Gy剂量条件下,辐射对种子发芽率、芽长和根活力指数有抑制作用;发芽势因品种不同而表现不同;供试品种间的种子活力辐射敏...