四种不同血清型IBV的多重PCR鉴定方法的建立

为了建立同时区分4种不同血清型IBV的多重PCR方法,试验针对IBV H120型、4/91型、QX型、LDT3型4种常用商用疫苗株的S1基因序列,分别设计特异性引物,并对退火温度、循环数和引物浓度等条件进行优化及特异性、敏感性、重复性等试验.结果表明:试验可特异性的扩增出 IBV LDT3型(860 bp)、H120型...     

多表位疫苗的研究进展及应用

多表位疫苗（multiepitope vaccine）也称鸡尾酒式疫苗,是同时携带多个与目标抗原相关的及辅助性表位的疫苗。多表位疫苗是由基于抗原表位的氨基酸序列制备的,是近年发展起来的一种独特的疫苗设计思路,代表了一种疫苗设计的新方向,对它的研究是基因工程疫苗研究领域里的热点之一。与传统疫苗相比,多表位疫苗有很多优势：能被具有多种遗传背景的MHC分子识别、结合,从而得到高效的递呈;在细胞免疫方面具有独特的优势,可有效应对病原微生物的变异和免疫反应中的诸多不利因素。文章综述了多表位疫苗的研究进展及应用。     

四川省规模化猪场大肠杆菌质粒DNA分析

在系统鉴定、药敏试验和血清型鉴定的基础上,对23株致病性大肠杆菌和5株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析.结果表明,菌株的质粒获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱.质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系.     

芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的分泌表达

根据枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得不含有信号肽序列的phyC基因表达片段,亚克隆到毕赤巴斯德表达载体pPIC9K的多克隆位点,并电转化毕赤巴斯德酵母GS115.经MD和MM平板筛选、酶活性测定,获得了阳性转化子PP9KC.首次在毕赤巴斯德酵母中实现了有生物学活性芽孢杆菌植酸酶的分泌表达,去糖基化试验表明该植酸酶的分子量为53.5 kD和50.9 kD糖基化程度不同的两种糖蛋白.用麦芽汁半合成培养基对PP9KC进行诱导培养,培养48 h后酶活可达到2453 U/mL,表达量为出发菌株的10.5倍.酶学性质分析表明,其酶促反应最适pH值为7.0,最适反应温度为65℃,经90℃处理10 min,残留酶活性为37℃时的78.2%.     

规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征感染混合细菌研究

规模化猪场爆发急性高热病,采集死猪肺脏病料和血清5份用RT-PCR方法进行PRRSVNSP2基因扩增,3份为猪繁殖与呼吸综合征阳性,编号为scwhn01,scwhn02和scwhn03.对scwhn01 NSP2基因进行克隆和序列测定分析,有30个氨基酸的不连续缺失,与VR2332,JXA1,BJ-4,HuN4,CH-1a,HB-1(sh)2002和HB-2(sh)2002的NSP2的同源率在74.2%~91.0%之间,并从病料中分离到2株细菌,编号分别为SNC0901和SNC0902,均使被攻毒小鼠死亡.16S rDNA测序并在Genbank中blast鉴定为副猪嗜血杆菌和大肠杆菌.对所分离的细菌进行17种抗生素药敏实验,对头孢噻呋、头孢噻吩等敏感;对克林霉素、阿莫西林/棒酸等中度敏感;对荷兰、林可霉素、丁胺卡那霉素和土霉素等耐药.表明该猪场因高致病性蓝耳病病毒混合感染副猪嗜血杆菌、大肠杆菌导致猪大量死亡.     

牛羊抗鸡传染性法氏囊病和新城疫二联高免血清的研制

鸡传染性法氏囊病(IBD)相鸡新城疫(ND)是目前危害养鸡生产最严重的两种疫病。许多鸡场对该两种病进行了密集免疫,但由于疫苗质量、母源抗体水平、野毒存在、免疫程序等的差异,免疫后仍有疫病流行,而且IBD、ND常呈混合感染。以往对IBD、ND病暴发后采用紧急接种,对症治疗。但效果不理想,经济损失严重,近年来采用高免卵黄进行治疗取得一定效果,但由于经蛋传播传染病的存在,卵黄抗体的应用受到限制。高免血清是最有效的治疗药品,但由于价格较高而未广泛采用。本试验通过免疫程序筛选,宰前牛羊的综合利用,制成了高效价的免疫血清,降低了成本。抗IBD、ND二价高免血清用于暴发     

PCR-DGGE技术用于猪场沼气池细菌群落分析的条件优化

本研究采用变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）技术研究猪场沼气池细菌群落,对基于16S rDNAV3区的PCR-DGGE电泳的最佳变性剂梯度范围、电泳时间、染色时间进行优化。研究结果表明,最佳变性剂梯度范围为35%～60%,电泳时间为12h,SYBR Green Fluorescent Dye染料的染色时间是30min,优化后的PCR-DGGE确保了实验的准确性、灵敏度和可重复性。运用此优化后的PCR-DGGE技术对5个猪场沼液细菌群落进行了研究,获得了较丰富的多样性。该实验为深入研究畜禽养殖粪污治理的菌种筛选奠定了基础。     

糖及硫酸铵对植酸酶热稳定性的影响

植酸酶可作为单胃动物的饲料添加剂,其饲喂效果已在世界范围内得到肯定。但目前植酸酶在饲料中的推广和应用还相当有限,主要原因在于:1)植酸酶在天然原料中含量太低,难以大量生产;2)植酸酶的热不稳定性使其不能完全满足饲料加工、贮藏和使用的要求。随着基因工程技术的发展,植酸酶在天然原料中含量太低的问题已基本得到解决,但植酸酶的热稳定性问题仍然存在。饲料加工制粒中有一个短暂的高温阶段,温度一般在75～93℃,植酸酶的活性在此高温下,将大幅度不可逆丧失。为提高植酸酶的热稳定性,我们探讨了海藻糖、葡萄糖、甘露醇、硫酸铵对植酸酶…     

雉鸡禽霍乱的诊断及病原血清型鉴定

雉鸡禽霍乱的诊断及病原血清型鉴定王红宁，廖德曳，张化贤，谢后清，柳苹，郭登福（四川农业大学动物科技学院，雅安，６２５０１４）雉鸡（又称七彩山鸡）家养是我国近十年来发展规模较大的一项新型高效珍禽养殖业，其经济效益可达普通家鸡的３－５倍，雉鸡疾病防疫已成...