BCG感染巨噬细胞后内质网应激对细胞焦亡的调控作用

旨在探讨牛分枝杆菌疫苗株卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）感染人单核巨噬细胞THP-1细胞后内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）对细胞焦亡的调控作用及分子机制。在BCG单独感染THP-1细胞或与ERS抑制剂TUDCA共处理细胞后,采用qRT-PCR检测ERS标志性分子GRP78,细胞焦亡标志性分子GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达,采用Western blot检测GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3在蛋白水平的表达,采用ELISA检测IL-1β和IL-18的释放量,采用CCK-8检测细胞存活率。结果表明：在BCG单独感染THP-1细胞不同时间后,GRP78在mRNA水平和蛋白水平的表达均随感染时间延长而升高（P<0.01）,GSDMD蛋白表达在24 h达到最高,IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达呈时间依赖性（P<0.01）。在BCG单独感染或与TUDCA共同作用细胞24 h后,与未感染对照组相比,BCG感染组GRP78、GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA水平表达上调（P<0.05）,GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3蛋白水平表达上调（P<0.001）,IL-1β和IL-18的浓度增加（P<0.01）,细胞存活率下降（P<0.001）,而经TUDCA预处理的BCG感染组与BCG单独感染组相比,以上分子的表达下降,细胞存活率上升（P<0.01）。综上表明,在BCG感染THP-1细胞后,引起的ERS对细胞焦亡具有调控作用。     

重组结核分枝杆菌CFP10蛋白对A549细胞TLR信号途径介导的炎症反应的影响

本研究旨在检测重组结核分枝杆菌10 ku培养滤液蛋白（culture filtrate protein 10,CFP10）对肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞Toll样受体（TLRs）信号途径及其介导的炎症反应的影响。PCR扩增cfp10目的基因片段,构建重组质粒载体pCzn1-CFP10。将重组质粒pCzn1-CFP10转入BL21（DE3）大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白CFP10（rCFP10）并鉴定,纯化rCFP10,去除内毒素及脱盐备用。设置对照组,利用MTT检测rCFP10对A549细胞的存活率的影响;通过qRT-PCR、Western blot及ELISA等技术,分别在转录和翻译水平检测rCFP10对A549细胞TLRs信号途径关键分子及其下游炎症因子表达的影响。结果显示,成功构建重组表达载体pCzn1-CFP10并表达纯化出高纯度的rCFP10。MTT结果显示,随着rCFP10浓度增加和处理时间延长,A549细胞存活率显著降低。与空白对照组相比,rCFP10分别从转录和翻译水平显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）上调A549细胞中TLRs途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平。rCFP10蛋白可以通过激活A549细胞TLRs受体信号途径促进细胞炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据。     

脂质体-禽巴氏杆菌荚膜抗原的免疫研究

将禽巴氏杆菌荚膜粗提物经SephadexG—200分子筛凝胶过滤层析,获得纯化荚膜抗原;然后用反相蒸发法制备脂质体-荚膜抗原(A组),并以单纯荚膜抗原(B组)、禽霍乱“731”菌苗(C组)作对照,进行免疫试验,以酶标单克隆抗体间接ELISA,分别检测IgM和IgG的效价.结果,免疫后3个组的IgM效价相差都不显著(P>0.05),A组的IgG效价明显增高,与其他两组差异非常显著(P<0.01).3个组的IgM、IgG消长规律一致,IgM于免疫后7d开始上升,峰值在14d,其后下降迅速,第8周后降至免疫前水平,IgG于免疫后14d开始明显上升,峰值在28d,其后缓慢下降.保护率,A、B、C组分别为67％、33％、33％.结果表明,脂质体对禽巴氏杆菌荚膜抗原具有明显的佐剂作用.     

宁夏部分地区鸡大肠埃希菌的分离与血清型鉴定

为调查宁夏地区鸡大肠杆菌病的流行情况,采集宁夏4个地区的103个规模化鸡场疑似病料151份,通过病原菌分离鉴定及生化试验,鉴定出鸡大肠埃希菌109株,平均分离率为72.19%(109/151);动物试验证实,59株分离菌有致病性,占分离菌54.13%(59/109);对致病性菌株进行血清型鉴定,确定血清型种类13种38株,占致病性菌株64.41%(38/59);优势血清型分别为O15、O18、O78、O88,占定型菌株63.16%(24/38)。     

幼畜腹泻双价基因工程苗的安全性及免疫保护试验

用幼畜腹泻ＣＰＢ－ＳＴ双价基因工程苗对１６２８头孕孕母牛，２３４３只怀孕弱羊进行免疫接种，所有接种的怀孕母畜均无任何不良反应，所产幼畜均发育正常。免疫母牛共产犊牛１６２８头，发生腹泻者８８头，发病率为５．４％，死亡２６头，死亡率为１．５９％，与对照组（发病率４６．７％、死亡率２８．９％）相比，两组的发病率和死亡率均呈极显著差异（Ｐ〈０．０１）。免疫母羊共产羔羊２３４７只，发生腹泻者１３６只，发病率     

从新生羔羊腹泻病畜体内检出鼠伤寒沙门氏菌的报告

我们于1986年2月在宁夏巴浪湖农场新生羔羊腹泻病的两例病料中分离到两株鼠伤寒沙门氏杆菌,报告如下。材料方法1.采集病料以无菌手续采自该场两只病死羔羊的肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结和有病变的回肠段作为分离的材料。2.涂片染色镜检将病料触片经革兰氏染色后镜检,均为革兰氏阴性、无芽孢荚膜、     

产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因。用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理，然后通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ｐＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点，转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切分析和ＰＣＲ扩增检测，证明重组质粒ｐＥＣＢ２中含有产气荚膜梭菌的β－毒素基因。经核苷酸序列分析，明确了克隆的β－毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。     

重组奶牛干扰素-α基因的原核表达

从健康奶牛的血液中分离白细胞，用刺激物诱导白细胞产生干扰素，采用RT—PCR扩增干扰素-α基因，构建原核表达载体pQE30-IFNα，用IPTG诱导表达。得到重组的奶牛成熟干扰素-α基因全长498bp，构建的原核表达载体诱导6h后表达量较高，表达产物的分子量约为20kD，从而获得了表达奶牛干扰素-α的基因工程菌株。