OPS法玻璃化冷冻山羊卵母细胞的研究

采用两种不同的冷冻保护液VSⅠ（EG＋DMSO）和VSⅡ（PROH＋DMSO），用OPS法对不同期的卵母细胞进行冷冻。结果表明：两种冷冻液VSⅠ和VSⅡ的冷冻效果差异不显著（P〉0．05），但从数据看。VSⅠ要优于VSⅡ；而不同期的卵母细胞对冷冻后的发育能力有明显的影响，无论是VSⅠ还是VSⅡ，GV期和培养10小时卵母细胞的形态正常率、成熟率、受精率差异不显著（P〉0．05），但GV期和培养10小时卵母细胞受精率均低于IVM期卵母细胞，它们之间差异显著（P〈0．05）。     

黄牛同期发情和超数排卵及取卵时间的研究

本地黄牛24头,利用二次PG(15-甲基前列腺素F_(2a))调整,进行同期发情,3个不同剂量组的效果表明:中等剂量每次5支(7.2mg)的效果较好达87.5％。不同年龄组比较发现:2.5～4.5岁黄牛同期发情效果(89％)明显高于4.5～8.5岁黄牛(57％)。进一步利用PMSG(孕马血清)超排处理表明:反应良好、一般,无反应各占1/3,且以3～5岁牛超排效果好;分析超排牛的排卵规律发现:排卵5个以上的牛排卵相对集中,排卵持续时间约在24h左右。进一步对卵子发育情况加以分析,发现要取到原核期前的受精卵,取卵时间宜在最后一次PG后74～76h或出现发情后的26～40h。且以后者推算为佳。     

牛排卵遥测器的研制和应用

一种新型排卵遥测装置用于牛排卵监测。遥测装置可对家畜的体温进行连续无损伤精确地测量和记录，从而根据体温的变化确定牛排卵与否。试验表明，牛排卵期体温可比非排卵期升高０．２～０．５℃，并可持续８～１０ｈ，经直肠检查和剖腹探查验证，注射甲基前列腺素（ＰＣｆ＿（２ａ））后诱导的排卵和自然发情牛的排卵时间分别为出现体温高峰后５～８ｈ和１５～１８ｈ，这种排卵期出现的体温高峰可以通过体温遥测装置进行监测，并且可依此来正确判断牛的排卵。     

白油佐剂对肉鸡肌苷酸及代谢物含量和血清抗氧化性能影响

试验旨在研究白油佐剂对肉鸡肌苷酸及代谢物含量和血清抗氧化指标的影响。选用200只1日龄黄羽肉鸡作为研究对象,随机分成4组（Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ）,每组设5个重复,每重复10只。按照免疫程序,分别在第7、10、14、21和30日龄,对照组（Ⅰ组）仅注射生理盐水,活苗组（Ⅱ组）进行相应的活苗滴鼻并注射生理盐水,油乳剂疫苗组（Ⅲ组）注射相应的油乳剂灭活苗,白油组（Ⅳ组）仅注射白油。第42天时,每组随机选取20只（每重复4只）肉鸡进行样品采集,测定胸肌肌苷酸及代谢物含量和血清抗氧化指标。结果表明,白油组肌苷（INO）含量显著低于对照组（P<0.05）;单磷酸腺苷（AMP）、二磷酸腺苷（ADP）及校正肌苷酸（IMP_c）含量各组之间差异不显著（P>0.05）;白油组血清超氧化物歧化酶活性（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶活性（GSH-PX）、丙二醛含量（MDA）与其他各组差异不显著（P>0.05）,但与对照组相比,MDA含量有所升高。     

人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建

[目的]以小鼠基因组为模板克隆乳清酸蛋白(whey acidic protein gene,WAP)5′和3′调控区,并构建人乳铁蛋白(Human Lactoferrin,hLTF)乳腺特异性表达载体。[方法]以高保真PCR技术扩增WAP5′和WAP3′长度分别为3.5 kb和4.6 kb的DNA片段,并克隆测序,应用体外连接技术连接pcDNA3.0、WAP5′、WAP3′和hLTF,转化连接产物,以限制性内切酶酶切、PCR验证和琼脂糖电泳鉴定阳性克隆。[结果]内切酶酶切及PCR鉴定结果显示,WAP5′和WAP3′基因克隆成功,其hLTF乳腺特异性表达载体构建正确。[结论]成功克隆WAP5′和WAP3′调控区;成功构建了hLTF乳腺特异性表达载体pW2-hLTF。     

不同细胞因子对山羊卵母细胞体外成熟与早期胚胎发育的影响

研究在培养液中添加不同浓度的GDNF、LIF、SCF及其不同组合对山羊卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。结果表明：SCF、LIF、GDNF对山羊卵母细胞体外成熟有显著影响（62．0％、75．5％、63．7％vs53．0％,P〈0．05）,不同浓度间无显著影响（P〉0．05）,添加LIF、GDNF对卵裂率有显著影响（48．1％、43．3％vs26．2％,P〈0．05）,SCF对卵裂率无显著影响（37．6％vs26．2％P〉0．05）,不同细胞因子都能显著提高囊胚率（21．6％、27．3％、26．2％vs6．3％,P〈0．05）。10IU&#183;mL^-1的LIF、15Iu&#183;mL^-1的GDNF和15IU&#183;mL^-1的SCF对山羊胚胎体外生产最好;GDNF＋LIF＋SCF组和GDNF＋LIF组卵母细胞成熟率显著高于LIF＋SCF,GDNF＋SCF,GDNF和LIF组（83．3％、80．3％vs72．8％、65．4％、63．3％、77．9％,P〈0．05）,GDNF＋SCF和LIF＋SCF添加组间对卵母细胞体外成熟无差异（72．8％vs65．4％,P〉0．05）,早期胚胎发育上GDNF＋LIF＋SCF组优于GDNF＋LIF、LIF＋SCF和GDNF＋SCF组,且均能显著提高卵裂率（50．2％、48．9％、47．9％、43．7％vs21．4％,P〈0．05）和囊胚率（31．3％、27．6％、25．5％、24．3％vs13．6％,P〈0．05）。可见GDNF、LIF和SCF能提高卵母细胞的成熟率,早期胚胎的卵裂率和囊胚率,LIF和GDNF对卵母细胞体外成熟有协同作用。     

澳系进口荷斯坦奶牛CXCR1基因遗传多态性与泌乳性状及体细胞评分的关联性分析

采用聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）技术对以海丰奶牛场588头澳系进口荷斯坦牛牛趋化因子受体1（Chemokine receptor1,CXCR1）基因的遗传多态性进行分析;采用混合动物模型分析CXCRl基因2个突变位点与测定日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、305d产奶量、305d乳脂量、305d乳蛋白量及体细胞评分7个性状的相关性,寻找可用于生产实际的分子标记。结果显示,CXCR1基因5’侧翼区-1830位点发生了A—G的突变,检测到AA、AG和GG3种基因型,频率分别为0．684、0．289和0．027,等位基因A和G的频率分别为0．828和0．172;GG基因型奶牛的日产奶量、SCS和305d产奶量均板显著高于AA基因型（P〈0．01）,而其乳脂率和乳蛋白率却显著低于AA基因型奶牛（P〈0．05）。编码区783位点仅发现AA和AC2种基因型,基因型频率分别为0．886和0．114,等住基因A和c的频率分别为0．943和0．057。AA型的个体的日产奶量、305d脂肪产量和305d蛋白产量极显著高于AC型个体,而其乳脂率、乳蛋白率和SCS却极显著低于AC型个体（P〈O．01）。结果表明,CXCR1基因遗传突变对澳系进口荷斯坦牛泌乳性状和乳房炎抗性有较大的遗传效应,可用于澳系进口荷斯坦牛的分子标记辅助选择。     

哺乳动物性别决定因子研究

哺乳动物性别决定是以位于雄性Y染色体短臂上被称为SRY基因为调控中心、多基因参与的级联调控过程,包括初级性别决定和次级性别决定,前者是由染色体决定性腺的发育方向,后者通常是指由性腺分泌的激素决定性腺以外的身体表型,即第二性征。本文主要论述了参与哺乳动物性别决定与调控的相关基因、可能作用机制及其研究进展等。