奶牛大肠杆菌与鲍氏志贺氏菌混合感染的诊疗

2006年8月某奶牛场新引进一批奶牛出现高热不退，配种4月左右的初产牛出现乳房炎，有犊牛死亡，将病死牛的病料及发病牛的乳样、血样送到扬州大学动物医院分离病原。     

一起猪大肠杆菌病的诊治

大肠杆菌是一种多宿主性致病菌，可感染多种畜禽，引起发病，临床上以腹泻、脱水死亡为特征。2000年2月，上海某猪场暴发猪大肠相菌病，死亡率高达90％，现将诊治过程报道如下。     

禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测

运用基因重组方法将庆大霉素（Gentamycin,GM）抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APEC E037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株,命名为E037（Δtsh）。E037和E037（Δtsh）株对1日龄鸡的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明E037（Δtsh）株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有明显下降。在243株禽源分离株中,有167株为tsh＋菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%（146/167）、12.6%（21/167）和0%（0/167）;O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%-100%,而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%,差异极显著（P〈0.01）。结果显示tsh＋株大多数为高致病性菌株,且其致病性与血清型的种类有一定的相关性,温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。     

活禽市场中4株鹅源新城疫病毒的分离与鉴定

过去,一般认为水禽对新城疫病毒( Newcastle disease virus,NDV)有较强的抵抗力,感染后不容易发病和造成流行或暴发.然而,自上世纪90年代后期以来,我国大面积出现了鹅群感染NDV并严重发病、死亡的事件[1,2],给养禽业造成了严重的威胁和损失,引起了众多研究者和从业者的高度关注.近年来鹅新城疫疫苗得到了广泛使用,为了评估使用疫苗后鹅群的NDV携带状况,本研究于2010年10月至2011年3月对江苏省扬州市活禽市场内鹅群中的NDV开展了调查,共分离到4株NDVs,并对其部分生物学特性以及F基因的遗传变异情况进行了分析.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 鸡胚与标准阳性血清抗NDV单因子阳性血清由本实验室制备并提供;SPF种蛋购自山东省家禽研究所SPF种鸡场,在本实验室孵化至10日龄使用.     

新城疫病毒ClassⅠ与ClassⅡ毒株交叉血凝抑制试验快速分类

ClassⅠ新城疫病毒(NDV)分离自健康家禽泄殖腔棉拭子,其基因序列与ClassⅡNDV存在很大差异,为了建立简单快速的NDV分类方法,用SPF鸡制备ClassⅠ和ClassⅡ毒株多价抗血清分别与选取的ClassⅠ和ClassⅡ代表毒株进行交叉血凝抑制反应。结果表明所有ClassⅠ毒株比同ClassⅡ毒株的交叉血凝抑制值高8～64(3～6log2)倍;而ClassⅡ毒株与ClassⅡ抗血清的HI效价比同ClassⅠ毒株的交叉血凝抑制值高2～8(1～3log2)倍,结果与基因分型高度一致,说明可以用交叉血凝抑制试验进行初步分类。本研究结果显示,NDVClassⅠ弱毒株血凝性与广泛应用的NDV弱毒疫苗株不同,基因序列分析可以部分解释这种差异,另外可能HN蛋白的空间结构也会影响其与血凝素结合的特性。     

羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选

孔雀石绿（malachite green,MG）是一种易溶于水和乙醇等的基础染料,可在多种行业应用,并曾用于水生动物多种疾病如真菌病、寄生虫病、细菌性疾病等的治疗。但因其具有致癌等毒副作用,目前已被禁用。然而市场上仍有在水产品违法使用MG的现象,因此需要加强对该药品残留的检测。本研究选择羊驼免疫库筛选抗MG纳米抗体,通过噬菌体ELISA筛选高亲和力和特异性的纳米抗体。通过辅助噬菌体M13的救援,使得纳米抗体基因（VHH）与噬菌体外壳蛋白基因融合表达,从而使得VHH蛋白展示在噬菌体表面,通过有限稀释筛选和多次洗脱的办法,获得含有目的基因的单个噬菌克隆;将重组质粒PMES4-VHH转化到表达细胞中,进行体外表达。最后采用NI-NTA柱进行His标签纯化,得到抗MG纳米抗体,并进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果显示：噬菌体文库成功构建,库容为3.2×108 cfu/mL;通过ELISA筛选,得到16个具有抑制效果的噬菌体克隆,经对噬菌体基因测序并翻译,得到2种氨基酸序列;将重组质粒转化至表达菌株表达、纯化,最后得到大小约为15 kDa的抗MG纳米抗体,从而为MG的下一步检测奠定了基础。     

新城疫病毒感染细胞的双向凝胶电泳方法建立及其初步分析

为了研究新城疫病毒(NDV)和宿主细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)为材料,对细胞培养方式、样品制备方法、上样量、等电聚焦以及凝胶染色等步骤进行一系列优化,建立了NDV感染CEF的双向凝胶电泳技术。运用PDQuest8.0.1软件对电泳图谱分析后显示:17cmIPG胶条(pH4～7)对应的凝胶上可检测到800个左右蛋白点、蛋白点匹配率达90%,表明NDV感染CEF蛋白质组双向凝胶电泳模型稳定、分辨率高、重复性好。电泳图谱上共发现36个差异表达明显的蛋白点,其中上调表达蛋白点有16个,下调表达蛋白点15个,新出现蛋白点3个,消失蛋白点为2个。NDV感染CEF双向凝胶电泳技术的建立为NDV的致病机理研究提供了有力的工具。     

鸡白痢沙门菌分离株的耐药性及磺胺类耐药机制研究

采用药敏纸片法,对33株鸡白痢沙门菌进行了药敏试验,结果显示丁胺卡那、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考的抑菌作用较强,所有受试菌株均对其敏感;58%～94%的受试菌株对氯霉素、新霉素、恩诺沙星和羧苄青霉素敏感;61%～88%的受试菌株对四环素、复方磺胺、磺胺异恶唑耐药。33株鸡白痢沙门菌分离株出现了多重耐药性,2耐及以上占85%,3耐及以上占66%,4耐及以上仅占27%。根据发表的序列设计了3对引物,分别扩增磺胺类耐药基因sul1、sul2和Ⅰ类整合子,所选的18个对磺胺及磺胺增效剂均耐药。分离株中94.4%(17/18)的菌株携带sul1基因,没有sul2基因,同时94.4%(17/18)的菌株携带Ⅰ类整合子,大小分别为0.7kb和1.6kb。研究表明这些鸡白痢沙门菌的耐药谱较窄,且Ⅰ类整合子在磺胺类耐药菌株的产生中起到很重要的作用。     

基于2019-nCoV对大学新开公选课《动物保护概论》教学模式的思考

2019新出现的新型冠状病毒肺炎给社会生活和人民健康带来了巨大的影响。然而关于此次疫情,有很多涉及动物保护有关的关注点：此次疫情是“天灾”还是 “人祸”? 人类新型冠状病毒的自然宿主来源是什么? 其易感动物包括哪些,是否包括宠物,我们怎样科学对待宠物？畜禽养殖业又将何去何从？毫无疑问,类似于2019新型冠状病毒肺炎等新型的社会问题给动物保护概论的教学提出了新的挑战。本文分析了动物保护概论课程的内容特点及其在当前教学中存在的问题,探讨了关于动物保护概论课程的教学内容设计、组织形式以及考核方式的教学改革。旨在为改革传统教学模式,提升教学质量提供借鉴。     

IP-10与A型流感病毒感染关系的研究进展

IP-10(Interferon-inducible protein-10)又名CXCL10,是γ-干扰素所诱导产生的一类可以趋化淋巴细胞的CXC趋化因子亚家族成员。研究发现IP-10表达水平与禽流感病毒感染后肺损伤的严重程度密切相关,在不同亚型流感病毒感染过程中IP-10表达水平也有所不同。文章对IP-10及其受体、IP-10与不同亚型禽流感的关系、IP-10作用的信号通路等进行了综述,并阐述了IP-10与其他疾病的联系,以及对IP-10作为流感治疗靶标进行了展望。