桑丁香假单胞菌糖基水解酶基因的克隆及表达分析

桑疫病的病原是一种丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae),其感染造成桑树幼枝断裂,但分解桑枝的机制尚未发现。以GenBank中同种的另一丁香假单胞菌的序列为参照,通过PCR法克隆了桑疫病病原细菌的糖基水解酶基因。该基因的读码框为1 173 bp,编码390个氨基酸,与已公布的丁香假单胞菌属细菌(pv.syringae B728 a)的纤维素酶基因的核苷酸同源性为94%,氨基酸的同源性为97%。对该肽段的序列进行分析,确定了保守位点和各个功能域的序列。将该基因克隆到原核表达载体pET28 a中,在大肠杆菌中进行了表达。Western blotting检测的结果表明,该基因在大肠杆菌中获得高效表达,酶活力为2.3×103U/L,说明该基因产物具有分解纤维素的酶活性。     

菌腔虫瘿的季节变化规律及其与暗褐网柄牛肝菌出菇的相关性

暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus)是目前唯一能够采用腐生栽培的方法进行菇房人工栽培的牛肝菌类食用菌。在野外,暗褐网柄牛肝菌与蚧虫和植物根系能形成一种特殊的结构:"菌腔虫瘿",并寄宿在植物根部。通过长期野外跟踪调查,对菌腔虫瘿的季节变化规律及其与暗褐网柄牛肝菌出菇的关系进行初步分析。结果发现,菌腔虫瘿的季节变化规律可划分为两季:雨水季(4～11月)和干旱季(12月～翌年3月)。在雨水季,多数菌腔虫瘿表面光滑、有色泽;虫瘿内部的蚧虫比较活跃,繁殖速度快,腔室内的虫龄结构复杂多样,菌腔虫瘿繁殖、转移和扩散到新根部位的速度较快;在干旱季节,菌腔虫瘿颜色变暗,表面粗糙甚至长霉菌;菌腔虫瘿内部的蚧虫繁殖速度较慢,虫龄结构相对单一,菌腔虫瘿繁殖及转移、扩散速度较慢。暗褐网柄牛肝菌出菇与菌腔虫瘿的变化规律一致,雨水季节暗褐网柄牛肝菌出菇茬数多、产量高,而干旱季节几乎无子实体形成;在4个调查点中,菌腔虫瘿数量与暗褐网柄牛肝菌子实体数量的相关系数分别达到0.874、0.861、0.904、0.815,在一定程度上暗褐网柄牛肝菌子实体数量与菌腔虫瘿数量总体变化趋势一致。     

云南硬皮马勃子实体营养成分分析

云南硬皮马勃(Scleroderma yunnanense)是我国的特有种,也是世界上唯一可食用的硬皮马勃种。主要报道了3个产地的云南硬皮马勃子实体营养成分测定结果,结果表明,云南硬皮马勃子实体含有丰富的矿物元素、蛋白质、粗纤维和粗脂肪,同时还含有丰富的氨基酸。其中3种云南硬皮马勃子实体Scl001、Scl002和Scl003的必需氨基酸含量与氨基酸总量的比值分别为34.2%、38.3%、27.1%,必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量的比值分别为0.521、0.621、0.371。     

暗褐网柄牛肝菌菌丝的生物学特性研究

首次对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长的生物学特性进行研究,结果表明:在实验范围内,菌丝生长的最适温度为30 ℃,最适pH值为4,菌丝生长不需要光照,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为酵母膏,最佳无机盐为KH2PO4+ MgSO4·7H2O.     

不同覆土的性质及其对暗褐网柄牛肝茵人工栽培出菇的影响

测定菜园土、果园土、堆制土3种不同覆土的物理、化学性质并检测其对暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus ortentosus)菌棒覆土出菇的影响,结果表明,以菜园土为覆土出菇效果最好;其物理性质与果园土无显著差异,但在全碳、全磷、有效磷、速效钾、有效锌含量上高于另外两种覆土,达到极显著或显著水平.     

桑椹天然食用色素的提取工艺研究

桑椹色素是一种新型的食用天然色素,属花青素类的水溶性色素,饮料制品以万分之二着色,色感好,无异味。提取时可用纯水作溶剂,干桑果的料液配比以1:10、提取温度以75℃、提取时间以2小时为宜,用二次浸提工艺,色素得率可达73.36%。     

家蚕凋亡蛋白酶(caspase-1)基因在大肠杆菌中的表达

为了研究家蚕凋亡蛋白酶(caspase-1)的原核表达及剪切方式,用PCR法扩增出家蚕caspase-1基因的cD-NA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-caspase-1,并转化感受态细胞BL21,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导了caspase-1蛋白的表达。应用SDS-PAGE和Western blot分析对其性质作检测,诱导3 h后caspase-1蛋白得到剪切,5 h开始降解。研究结果表明,caspase-1基因可在大肠杆菌BL21中诱导表达,并且能够进行自我剪切。     

家蚕细胞周期素E基因在5龄幼虫组织表达的剪切变体和表达谱特征

细胞周期素E(cyclinE)是调控细胞周期从G1期进入S期的关键因子。利用家蚕基因组数据库信息设计引物,克隆家蚕cyclinE在5龄幼虫不同组织表达的cDNA序列,获得该基因的6种不同剪切变体,这6种剪切变体前4个外显子和最后一个外显子都相同,变化主要集中在第5~7外显子处。同源性比对显示,不同物种来源的cyclinE周期蛋白盒区域具有较高的保守性,有35个氨基酸的共同保守序列,该区域可能也是家蚕cyclinE的特异识别并结合细胞周期素依赖蛋白激酶的功能区域。利用实时定量PCR分析显示,cyclinE在家蚕5龄第3天幼虫的中肠、脂肪体、丝腺、脑、马氏管、精巢、卵巢、血液等8种组织、器官中均有表达,并且在脂肪体中的表达相对较高,推测cyclinE基因在家蚕脂肪体细胞分裂过程中发挥重要作用。     

6种金属离子对灵芝纤维素酶活性的研究

研究了Cu2 、Mn2 、Fe2 、Mg2 、Zn2 及K 6种金属离子对灵芝纤维素酶活性的影响,测定底物中分别添加6种金属离子及不同离子浓度梯度下,灵芝纤维素酶的CMC酶活.结果表明,Cu2 、Mn2 和Fe2 对灵芝纤维素酶有抑制作用,Cu2 和Mn2 在离子浓度较低时就具有很强的抑制作用,Fe2 浓度增加至1.2 mg/mL时,其对纤维素酶的抑制作用明显增大;Mg2 、Zn2 和K 对纤维素酶酶活都有促进作用,Mg2 和Zn2 在低浓度时就有较强的促进作用,K 在试验范围内的离子梯度下,促进作用不是很明显.从试验比较分析可知,金属离子可能对来源于不同菌种的纤维素酶有较大的影响.在这项试验范围内,Cu2 、Mn2 和Fe2 是灵芝纤维素酶的抑制剂,Mg2 和Zn2 是灵芝纤维素酶的激活剂.     

家蚕溶茧酶基因的克隆、序列分析及原核表达

【目的】获得家蚕溶茧酶基因的全长序列,实现溶茧酶基因在大肠杆菌中的融合表达。【方法】利用cDNA末端扩增技术（RLM-RACE）克隆了家蚕溶茧酶基因cDNA序列（GenBank 登录号：EF428980）。【结果】家蚕溶茧酶基因cDNA序列全长1 047 bp,其中780 bp的蛋白质编码区可编码260个氨基酸,预测蛋白质分子量为27.6 kD,等电点（pI）为8.89。家蚕溶茧酶基因包含4个内含子。用Signal P 3.0 Server程序分析家蚕溶茧酶基因,预测其从第1～22位为信号肽序列。SMART分析结果预测其第34～254位氨基酸序列具有类胰蛋白的丝氨酸蛋白酶活性。重组质粒pET-32a-Cocoonase 转化E.coli BL21进行原核表达,SDS-PAGE分析结果表明,家蚕溶茧酶基因以融合蛋白形式表达,相对分子量为48 kD。【结论】本研究成功地克隆、表达了家蚕溶茧酶基因,分析和预测了它的结构和功能,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。