一株鸵鸟源新城疫病毒的分离及其分子生物学特性

从2005年山东省某鸵鸟饲养场发病鸵鸟分离出1株新城疫病毒，命名为SD01，采用一步法R-PCR扩增了该分离株F基因的重要功能区片段（535bp），并将其克隆到pMD18-T载体中，进行序列测定，研究了其分子生物学特性。序列分析结果表明，该分离株F基因裂解位点的氨基酸组成与NDV强毒株的特征性结构一致（^112R—R—Q-K—R-F^117）；遗传进化分析表明，该分离株在分类地位上属于基因Ⅶd型，与目前报道的鸵鸟源和其他禽类NDV毒株基因型一样，说明目前我国流行的仍然是NDV基因Ⅶ型。提示，对于鸵鸟新城疫的防治，除进行疫苗免疫之外，采取生物安全措施也是非常重要的。     

重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究Ⅳ.与IDEXX ELISA试剂盒及Western blot的比较

利用重组N蛋白抗原建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的ELISA方法并组装成试剂盒，将试制的3批试剂盒分别与IDEXX生产的试剂盒及Western—blot进行了符合率试验。试验结果表明，所研制的试剂盒与Western blot的符合率达97．67％以上。对460份临床血清分别用自制的试剂盒和IDEXX公司生产的试剂盒进行检测，其中有37份不相符合，用Western blot对这37份血清进行验证，有35份血清检测结果与自制的试刺盒检测结果一致。由此表明，自行研制的试剂盒，其特异性和敏感性均能满足目前临床上该疫病的流行病学分析或免疫抗体检测。     

小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法的初步建立

【目的】通过表达羊PrPc核心片段、单抗制备，最后建立免疫组织化学检测羊痒病方法。【方法】用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrPc核心片段DNA， 并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET-32a（+）上，转化至E.coli BL21，IPTG诱导融合表达。以纯化的重组小尾寒羊PrPc核心片段免疫PrPc基因敲除小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，制备羊核心片段单克隆抗体。【结果】通过上述方法，得到相对分子质量约为35 kD的重组小尾寒羊PrPc核心片段，筛选出六株能稳定分泌针对小尾寒羊PrPc核心片段特异单抗的杂交瘤细胞株。免疫组化试验表明,其中4株可特异性识别羊痒病脑组织切片中耐PK酶消化的PrPsc，经5次重复试验表明：所制备单抗与对照单抗F89结果完全一致。【结论】利用原核表达，单抗制备等技术制备出PrP特异性单克隆抗体，用笔者自己研制的单抗作为核心试剂初步建立了羊痒病免疫组化检测方法。     

热应激蛋白70-肽疫苗与传染性疾病免疫

热应激蛋白（heat stress proteins，HSPs）是机体受到应激原的刺激后产生的几族（如HSP70家族、HSP90家族等）高度保守的蛋白质，对维持细胞生存和内环境的稳定起重要作用。其中HSP70家族的HSP70是研究最多的，因为它在大多数生物中含量最多，在细胞应激后生成最显著。HSP70是机体一种重要的非特异性细胞保护蛋白，具有多种生物学功能，如分子伴侣，抗细胞凋亡，抗氧化作用，此外在免疫反应中也起重要作用。HSP70-肽疫苗是HSP70和抗原多肽结合形成的复合物，它可以直接从肿瘤组织或肿瘤细胞系中提取得到，即HSP70-肽肿瘤疫苗；也可以采用生物工程技术的方法在体外表达HSP70，再与已知的抗原多肽交联得到。其中HSP70-肽肿瘤疫苗是研究最多的，已成为肿瘤研究的一个重要内容，HSP70-肽肿瘤疫苗的可行性在实验动物已得到证实，显示了良好的应用前景。     

非洲猪瘟病毒载体疫苗研究进展

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的一种烈性传染病,严重影响畜牧业发展,可造成巨大经济损失,目前对其仍缺乏有效的治疗手段,其疫苗也处于研究阶段。病毒载体疫苗作为一种经济省时的新型疫苗,免疫效果稳定且安全,可用于递送ASFV免疫原,对于发展ASF免疫防控技术研究有着重要意义。本文对ASFV病毒载体疫苗研究进展进行综述,重点介绍ASFV现有病毒载体疫苗免疫原选择和各病毒载体抗原递呈效果及其免疫原性,为后续ASFV的免疫学研究和病毒载体疫苗研发提供参考。     

鸡沙门氏菌弱毒苗的安全性和免疫效力试验

把鸡沙门氏菌弱毒苗按不同剂量分别经口服和颈部皮下接种１日龄商品蛋鸡来进行安全性和免疫效力研究,结果表明：该疫苗对１日龄雏鸡有良好的安全性并能提供较强的保护力。     

非洲猪瘟病毒K205R蛋白基因原核表达的研究

本研究合成非洲猪瘟的K205R基因,将K205R基因克隆至pET-30c(+)质粒,构建重组原核表达质粒pET30C-K205R。该重组质粒的阅读框架正确,表达的融合蛋白的N端和C端均带6×组氨酸。pET30C-K205R-BL21菌株经培养和诱导表达后,可生产K205R可溶性蛋白,K205R可溶性蛋白可用Ni柱纯化。纯化表达K205R蛋白的ELISA试验证明,表达的K205R蛋白与猪阳性非洲猪瘟血清具有较好的特异性反应。     

禽流感病毒分离株 A/Chicken/Wangcheng/4/2001(H9N2)核蛋白基因(NP)的克隆和序列分析

用无特定病原体 (ＳＰＦ)鸡胚增殖禽流感鸡体分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｗａｎｇｃｈｅｎｇ／４／２００１(Ｈ９Ｎ２)(ＷＣ２００１),提取病毒总ＲＮＡ。根据已发表的Ａ型流感病毒株ＮＰ基因序列 ,设计一对引物 ,运用反转录 -聚合酶链反应(ＲＴ -ＰＣＲ)扩增该病毒分离株的ＮＰ基因 ,克隆后进行序列测定。序列分析表明 ,扩增的ＮＰ基因为相应的开放阅读框架。ＷＣ２００１株ＮＰ基因序列与数株Ａ型流感病毒ＮＰ序列进行比较 ,相互间同源性在８０%左右 ,其中与Ａ／Ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／Ｙ２８０／９７(Ｈ９Ｎ２)有很高的同源性 ,而与人流感病毒株和猪流感病毒株差异较大 ,显示禽流感病毒特征。     

沙门氏菌属特异单克隆抗体检测试剂的研制及初步鉴定

以具有不同O和H抗原的沙门氏菌制备免疫原,用常规方法产生杂交瘤细胞,经过对不同O和H抗原沙门氏菌全或无反应的筛选,得到4株反应谱广的沙门氏菌单抗,分别命名为CB_8、de_7,、cc_6和DD_4。单抗CB_8和de_7在对沙门氏菌属的反应性上具有互补的特点,二者可和受试的A-O_(67)群沙门氏菌及亚利桑那沙门氏菌83个血清型共96株中的95株发生反应,覆盖率达99％,其中包括了在我国引起人类疾病和食物中毒的绝大多数菌型,但在属外不与受试的21株其他肠杆菌反应,从而为沙门氏菌检验提供了优良试剂。同时,这组单抗在沙门氏菌共同抗原和致病机理的研究方面亦具有重要意义。     

小反刍兽疫——一种家养和野生小反刍动物的瘟疫

小反刍兽疫是一种急性、热性、接触性传染病,主要感染小反刍动物,具有极高的高发病率和死亡率,我国将其列为一类传染病。在非洲、中东以及南亚许多国家发生,造成巨大损失。本文对小反刍兽疫病原学、流行病学以及诊断、防治等方面进行综述。