中等毒力新城疫病毒ND03-026株全基因组遗传特性分析

从2003年临床发病鸡群当中分离到1株NDV,经致病指数测定为中等毒力。通过RT-PCR技术扩增了其F基因主要功能区片段,并构建了遗传进化树,发现其在分类地位上属于基因Ⅱ型,与我国现用的疫苗株LaSota处于不同的亚群,且裂解位点的组成为典型强毒株序列。对其全基因组序列进行测定,结果已登陆GenBank,登录号为DQ060053。此分离株基因组由15 186个核苷酸组成,编码6种结构蛋白,顺序为3-′NP-P-M-F-HN-L-5′。通过对其6个编码区进行遗传进化与核苷酸和氨基酸同源性分析,结合致病性结果发现其与Roakin毒株的遗传关系最近。     

貂、貉源犬瘟热病毒流行毒株H基因的克隆及遗传多样性分析

为研究鼬科动物犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)毒株的变异特性,对分离自不同地区貉、貂的5个CDV毒株和1个CDV国内弱毒疫苗株(vacChina)的H基因进行了核苷酸测序,并与12个参考毒株构建系统发生树。结果表明:5个流行毒株之间H基因核苷酸序列同源性均达到97.5%以上,vacChina与5个流行毒株的H基因核苷酸序列同源性普遍较低(90.5%～91.8%),而与国外疫苗株Convac和Onderstepoort的H基因核苷酸同源性达96.8%和97.2%。流行毒株之间H蛋白氨基酸同源性差别不大(97.1%～100.0%),流行毒株与vacChina疫苗株H蛋白氨基酸同源性普遍较低(89.7%～91.8%),vacChina与Onderstepoort、Convac有着很高的同源性,其H蛋白氨基酸同源性分别为97.1%、95.6%。结果分析显示,CDV的流行和免疫失败现象的发生与国内所用疫苗毒株和野毒株的遗传关系甚远有关。     

运输应激猪组织病理性损伤、HSP_(27)的组织分布及其相关性研究

利用组织学、免疫组织化学以及临床血液检测等方法,探讨持续运输应激对育肥出栏猪组织的病理性损伤以及组织损伤与HSP27组织定位之间的相关性。结果表明:运输应激初期(1～2h),反映组织损伤的血液肌酸激酶(CK)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性都显著升高;应激4h时,CK及AST活性有所下降;当应激持续到6h和10h时,CK活性又显著升高。组织病理损伤也呈现出相似的波动变化。免疫组织化学结果显示,随着应激时间的延长,HSP27在组织中的定位没有发生肉眼可见的变化;HSP27主要分布在心肌和肝细胞胞浆中,在背最长肌的细胞浆和细胞核中均呈强阳性表达,在肺脏细支气管的黏膜下层有强阳性表达,在受检组织的血管壁及内皮细胞中也有强阳性表达。     

猪hsp70和hsp90荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列,设计并合成3对引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,系列稀释作为阳性标准品,用于标准曲线的绘制和样品检测,并用持家蛋白GAPDH基因对样品进行归一化,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测.结果证明,建立的一步法荧光定量RT-PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量,可用于猪hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA水平的检测.     

交流新平台——寿光菜博会培养开放型农民

寿光菜博会不仅是农业科技的超浓缩“精华版本”,而且把崭新的国际交流平台搬到寿光市的乡间阡陌。看着展示的上千个新品种和几百项新技术,农民尽情“吮吸”这其中蕴含的新思想、新理念。在这里,新与旧激烈碰撞，理论与实践有效结合，农民观念不断更新，思想全面开放，每届菜博会都会引发一场新的“理念革命”。     

疯牛病的检测技术与防治

80年代中后期英国第一次大规模暴发的疯牛病以来,随后在多个国家也相继暴发了疯牛病病例,严重影响着各国经济贸易的发展,并且严重威胁着人类的生活健康。为了减少疯牛病对国家经济的影响,定期的检测是必不可少的,防治工作更是任重道远。本文就疯牛病的检测与防治做一下简要叙述。     

猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗免疫效力试验

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）1987年最早发现于美国，1995-1996年我国大陆从进口种猪中检出该病并分离到病毒一。目前，该病在世界大部分地区已经广泛流行。由于用弱毒苗防疫后存在毒力返强或隐性发病的缺点一，灭活疫苗正受到越来越多的养殖场（户）的青睐。为预防和控制该病，自2002年以来，我们进行了猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的研究。经临床应用表明，该疫苗能有效地预防和控制由PRRSV感染引起的疫病。报告如下。     

肉鸡HSP70的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

 【目的】制备高特异性的肉鸡热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）单克隆抗体,研究肉鸡HSP70与热应激损伤的关系。 【方法】 利用RT-PCR方法扩增肉鸡HSP70 mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy 载体和原核表达载体pET-28a(+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70。以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性。以纯化的重组肉鸡HSP70免疫Balb/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。【结果】获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步通过免疫印迹分析筛选出1株高特异性的肉鸡HSP70单克隆抗体,命名为BH70-1。 【结论】免疫组织化学结果显示,单克隆抗体BH70-1是一种理想的抗体。     

利用流式细胞术检测H4亚型禽流感病毒感染细胞

以不同稀释度的H4亚型禽流感病毒(AIV)感染MDCK细胞,分别在添加与不添加TPCK-胰酶的培养基中培养36 h后收集细胞。经固定后,加入抗H4亚型AIV的单抗2C11,继续加入荧光标记的抗鼠Ig抗体,用流式细胞仪(FCM)分析不同条件下病毒感染的细胞,并用血凝(HA)试验检测细胞培养上清中病毒的HA效价。FCM结果表明:不论加TPCK-胰酶与否,均能引起病毒的感染,且随着感染剂量的增加,含有病毒细胞的比率增加。相比而言,加胰酶后,低剂量感染便可引起病毒在MDCK细胞内大量增殖,并能检测到细胞上清中的病毒。FCM与HA试验相比,FCM试验更敏感,更能反应病毒在感染早期的增殖情况。     

热应激下肉鸡心肌的损伤和热休克蛋白的定位

将90只肉鸡随机分成A组(对照)、B组(热应激6h)、C组(热应激12h)、D组(热应激18h)、E组(热应激24h)和F组(热应激48h)。对各组受试鸡心肌进行病理组织学检查,并利用4种HSP单克隆抗体(HSP27、HSP60、HSC70和HSP86)对心肌纤维进行免疫组织化学染色。实验结果显示,热应激时心肌纤维的病理组织学损伤主要表现为心肌纤维变性和心肌纤维断裂;HSP27、HSP60、HSC70和HSP86在心肌纤维中的定位不尽相同,HSP27、HSC70,和HSP86在心肌纤维中有强阳性表达,但HSP60的阳性染色较弱。提示HSPs在心肌纤维内的广泛分布对保护心肌纤维方面可能起重要的作用。