规模化采胚试验总结报告

应用进口的CIDR和国产的FSH、PGF2a对西门塔尔牛进行超数排卵，结果表明处理的供体牛的发情率达到了100％、供体牛头均采取可用胚；成年母牛7．43％枚、青年母牛8．67枚。     

澳大利亚荷斯坦奶牛自然发情与同期发情超排结果的比较

牛胚胎移植技术70年代已在国外开始商业化应用,并且规模不断扩大.我国开展此项研究虽有20余年的时间,但在90年代中期以前,生产中应用规模小,技术推广进展缓慢,其中一个主要限制因素就是胚胎来源问题.为了探索解决胚胎来源的有效途径,我们对自然发情牛和同期发情牛超排结果进行对比,现将结果报告如下.     

牛性控精子体外受精相关性问题

对牛分离精子体外受精研究进展、影响分离精子体外受精的因素及其体外受精可行性问题作了详尽的论述,并对分离精子体外受精技术的应用前景进行了展望。     

牛乳铁蛋白基因N-lobe的cDNA克隆及毕赤酵母表达载体的构建

以牛乳腺组织总RAN为模板,经RT-PCR得到牛乳铁蛋白基因的N-lobe片段并将其克隆到pGM-T克隆载体上,最后将其连入表达载体pPICZαA中,构建牛乳铁蛋白基因N-lobe的酵母表达载体.结果表明:克隆片段大小为1028bp,与Gen Bank中登录的序列的相应部位相比, 所获牛乳铁蛋白N-lobe cDNA 序列的同源性为99.7%;重组表达质粒经酶切和PCR鉴定构建正确,为酵母表达乳铁蛋白基因N-lobe奠定了基础.     

转GFP基因核移植牛胚胎的研究

试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白（GFP）-新霉抗性（neo-）双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF（表皮生长因子）对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高,但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20 ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著（P>〖JP2〗0.05）;mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎。     

哺乳动物胚胎干细胞研究进展

胚胎性干细胞包括从动物早期胚胎的卵裂球、囊胚内细胞团细胞分离建系的胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC）、从胚胎生殖嵴原始生殖细胞（primordial germ cell,PGC）分离建系的胚胎生殖细胞（embryonic germ cell,EGC）和来源于畸胎瘤中的胚胎性癌细胞（embryonic carcinoma cell,ECC）。ESC具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力,能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。所以,被广泛应用于胚胎发育与细胞分化调控的研究,作为修复器官与器官移植的种子细胞,并可用于转基因动物的生产。作者主要综述了干细胞的最新研究进展,ESC培养扩增诱导机制,定向分化方法。     

关于影响性控精子体外受精的因素及应用前景展望

本文对牛分离精子体外受精研究进展、影响分离精子体外受精的因素及其体外受精可行性问题进行了综述，并对分离精子体外受精技术的应用前景提出了展望。     

影响黑白花母牛超排效果的主要因素分析

4年间超排307头次黑白花母牛的结果表明:①用高纯度的FSH超排供休母牛,所得的可用胚胎的比率高于普通FSH(P<0.05);②用FSH和PMSG+aPMSG超排的成功率和可用胚胎数分别是90.77%、89.29%和5.42、5.57枚(P>0.05);③供体母牛开始超排时黄体对侧卵巢有活性,比静止和有卵泡的黄体数和可用胚胎数高;④A级黄体母牛的超排结果好于B级(P<0.05)和C级黄体(P<0.01);⑤第2、3胎供体母牛比其它胎次的可用胚胎数稍高;⑥在发情周期的第8～14天开始超排,其中第10～12天的卵巢反应最好;⑦重复超排4次,第4次的可用胚胎数比前3次低;⑧不同的年度、季节、产奶量和产后60天以后开始超排的时间对超排结果没有显著影响.     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文主要从卵母细胞孤雌激活机制、方法及影响因素,对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作一综述。     

应用X精子冷冻精液生产体内性控胚胎的试验

采用CIDR FSH PG法对206头优秀荷斯坦供体母牛进行超数排卵,其中实验组73头超排后用X性控冷冻精液输精(每头3支),获可用胚310枚,头均可用胚4.25枚;对照组133头,采用常规冷冻精液输精(每头3支),获得可用胚787枚,头均可用胚5.92枚,差异不显著。结果表明,用已分离的X精子冷冻精液对超排母牛进行人工授精生产体内性控胚胎是可行的。