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以牛乳腺组织总RAN为模板,经RT-PCR得到牛乳铁蛋白基因的N-lobe片段并将其克隆到pGM-T克隆载体上,最后将其连入表达载体pPICZαA中,构建牛乳铁蛋白基因N-lobe的酵母表达载体.结果表明:克隆片段大小为1028bp,与Gen Bank中登录的序列的相应部位相比, 所获牛乳铁蛋白N-lobe cDNA 序列的同源性为99.7%;重组表达质粒经酶切和PCR鉴定构建正确,为酵母表达乳铁蛋白基因N-lobe奠定了基础. 相似文献
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试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白(GFP)-新霉抗性(neo-)双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF(表皮生长因子)对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高,但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20 ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著(P>〖JP2〗0.05);mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎。 相似文献
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胚胎性干细胞包括从动物早期胚胎的卵裂球、囊胚内细胞团细胞分离建系的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、从胚胎生殖嵴原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)分离建系的胚胎生殖细胞(embryonic germ cell,EGC)和来源于畸胎瘤中的胚胎性癌细胞(embryonic carcinoma cell,ECC)。ESC具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力,能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。所以,被广泛应用于胚胎发育与细胞分化调控的研究,作为修复器官与器官移植的种子细胞,并可用于转基因动物的生产。作者主要综述了干细胞的最新研究进展,ESC培养扩增诱导机制,定向分化方法。 相似文献
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影响黑白花母牛超排效果的主要因素分析 总被引:6,自引:0,他引:6
4年间超排307头次黑白花母牛的结果表明:①用高纯度的FSH超排供休母牛,所得的可用胚胎的比率高于普通FSH(P<0.05);②用FSH和PMSG+aPMSG超排的成功率和可用胚胎数分别是90.77%、89.29%和5.42、5.57枚(P>0.05);③供体母牛开始超排时黄体对侧卵巢有活性,比静止和有卵泡的黄体数和可用胚胎数高;④A级黄体母牛的超排结果好于B级(P<0.05)和C级黄体(P<0.01);⑤第2、3胎供体母牛比其它胎次的可用胚胎数稍高;⑥在发情周期的第8~14天开始超排,其中第10~12天的卵巢反应最好;⑦重复超排4次,第4次的可用胚胎数比前3次低;⑧不同的年度、季节、产奶量和产后60天以后开始超排的时间对超排结果没有显著影响. 相似文献
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本文主要从卵母细胞孤雌激活机制、方法及影响因素,对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作一综述。 相似文献
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