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121.
免疫胶体金半定量检测牛初乳IgG含量方法的建立及初步应用 总被引:7,自引:0,他引:7
用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备了20nm粒径的胶体金,颗粒均匀,在检测时颜色清晰,易于辨析。胶体金标记牛标准IgG的最适稳定量为22ug/mL。标记后免疫胶体金用含有1%BSA和0.02%叠氮钠的0.01mol/L的PBS作为稳定剂,可使制备的免疫胶体金在4℃条件下保存3个月以上。制作的检测膜片可以在15min内显示结果,且结果可长期保存。用本方法和琼脂免疫单扩散法对10份牛初乳样品和6份牛初乳制品进行检测,结果显示:牛初乳及初乳制品稀释倍数与检测膜片显色同免疫单扩散法测定的结果均有很好的相关性,但灵敏度比琼脂免疫单扩散法低。本法不仅操作过程更为简单快速,不需要特殊仪器和设备;而且检测试剂的制备简单,稳定性高,更适合于作现场实验,因此本方法具有广泛的应用及推广价值。 相似文献
122.
从pMD18-THA阳性质粒扩增了H9N2亚型禽流感病毒的HA2基因,将扩增到的HA2基因克隆至昆虫杆状病毒转移栽体pBlueBacHis2A中。将其与杆状病毒共转染于Sf9昆虫细胞,经蚀斑筛选纯化重组杆状病毒,用其感染Sf9昆虫细胞,并优化表达条件。SDS-PAGE和Western-blotting分析表明,表达产物的分子质量约为27ku。Dot-ELISA分析表明,表达的HA2融合蛋白可与鸡抗HgN2亚型血清发生特异性反应,而与H5和H7亚型抗血清间无交叉反应。 相似文献
123.
重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白制备的鸡卵黄抗体的效力评价 总被引:1,自引:0,他引:1
为探索以重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白为免疫原制备鸡卵黄抗体的可行性,本研究利用基因工程技术,在大肠杆菌中高效表达重组K88ab和K99蛋白。分别以重组蛋白和提取的天然菌毛为免疫原制备抗K88ab和K99菌毛的鸡卵黄抗体,并对抗体效价、特异性以及抗体的预防和治疗效果进行了检测和比较。试管凝集反应结果显示,以重组蛋白为免疫原制备的鸡卵黄抗体效价最高可达1∶2 560,与用天然菌毛为免疫原制备的鸡卵黄抗体的效价基本一致。该抗体分别与K88ab+和K99+大肠杆菌发生特异性凝集,并能分别有效抑制K88ab+和K99+大肠杆菌对新生仔猪肠上皮细胞的吸附。临床应用结果显示,本实验制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为100%,保护率为91%;治疗有效率为100%,治愈率为87%。实验结果表明该卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢具有良好的预防和治疗效果。 相似文献
124.
从PHA活化的东北白鹅外周血淋巴细胞中分离提取总RNA,利用反转录PCR技术扩增获得鹅IL-2(GoIL-2)基因,连接至克隆载体后进行测序鉴定,结果与预期大小一致.将去除信号肽的成熟基因亚克隆至原核表达载体,构建原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌中进行诱导表达,用表达纯化的融合蛋白制备多克隆抗血清.此外,体外淋巴细胞增殖实验结果显示,鹅GoIL-2重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性,这为进一步研究GoIL-2的功能奠定了基础. 相似文献
125.
126.
127.
以猪轮状病毒地方分离株JL94株病毒核酸为模板,通过RT-PCR扩增内衣壳蛋白基因VP6 cDNA,将其插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行测序。从T载体上将VP6基因亚克隆到表达载体质粒pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并利用Ni^2 金属螯合亲合层析纯化融合蛋白。结果表明,VP6基因全长1356bp,并在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量可占菌体蛋白的26.5%,在表达的蛋白中,除45ku主要蛋白外,还有几条分子量较小的蛋白表达出来,这些融合蛋白经纯化后均具有良好的反应特异性。 相似文献
128.
用鸡空肠弯曲菌(Campytobacecriejun:)对1日龄SPF(Spciic-pathogenfrce)雏鸡进行感染实验。随机将60只1日龄SPF雏鸡分为4组,那和对照组,每组15只。分别用含菌7.5X108CFU/ml、7.5x104CFU/ml,7.5×102CFU/ml布氏肉汤菌液经口时t、J、I组接种。接种后分别于2、4、6,8、10日踏踏机取3只/组、经剖构观察病理变化;从心血、肝、胆汁、脾、肠内容物分离病原菌,测量肠道内物空肠弯曲菌菌数。得出以下结论;经口接种3.75x102CFU空场弯曲菌即可造成1日龄SPF雏鸡感染发病;感染鸡的主要病理变化为肝脏表面有点状,条索状或片状出血,同时伴有形状不规则大小不等的黄白色坏死灶,盲肠膨大充满气泡,十二指肠、空肠、直肠粘膜有散在的小出血点,首选检苗材料为胆汁、其次是脾、肝等器宫。 相似文献
129.
鹅细小病毒免疫血清的制备及其应用 总被引:1,自引:0,他引:1
应用鹅细小病毒(GPV)弱毒疫苗及灭活疫苗免疫111只2月龄鹅群,制备了GPV免疫血清,第二次免疫后68 d采取血清,经检测ELISA抗体效价达1:8000以上,经保护试验后初步应用于鹅细小病毒感染的田间防治,收到了良好的疗效。 相似文献
130.
在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的可溶性犬α7干扰素 总被引:1,自引:0,他引:1
为了在大肠杆菌表达系统中高效表达具有抗病毒活性的犬0干扰素(CaIFN-α),本研究从犬肝脏中PCR获得CaIFN-α第7亚型(CaIFN-α7)基因,通过重叠延伸PCR方法在CaIFN-α7的N端融合连接内含肽SspDnaB intein (SDI)基因,并将该融合基因连接至pMAL-c2X载体中,构建含有内含肽和麦芽糖结合蛋白基因的CaIFN-α重组质粒.重组质粒在大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导高效表达可溶性CaIFN-α蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析纯化后可以得到纯度较高的目的蛋白.重组蛋白经MDCK-CDV检测系统证明具有生物学活性,为该干扰素的大量生产及临床应用奠定了基础. 相似文献