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12.
应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响 总被引:3,自引:2,他引:1
根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列.在其中再插入一外源DNA序列.从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度,成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板,然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响。使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1.5、2.5、3.5、4.5、8.5、11.5mmol/L,处理24h,提取总RNA、逆转录,在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带。结果表明.随着丙酸钠浓度的升高.PCmRNA水平呈上升趋势,提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响。 相似文献
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[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8 ̄2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。 相似文献
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长春地区猪源链球菌分离株的病原特性研究 总被引:11,自引:0,他引:11
2000~2001年从长春地区分离到20株猪源链球菌,结合培养特征、生化特性及血清学反应等对其进行鉴定,其形态、染色、培养特征及理化特性基本符合猪链球菌的特点,大多具有α或β溶血,生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A~G乳胶分型诊断试剂盒检测20株分离菌,5株为C群链球菌,9株为D群链球菌,1株为G群链球菌,2株与D群和G群有交叉反应,3株不在检测范围。20株链球菌对小白鼠致病性有所差异。本实验可证实长春地区猪链球菌病的病原已不局限于原有的C群链球菌,因此研制针对本地区流行株的多价灭活疫苗已成为控制该病的当务之急。 相似文献
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2005年我场种植春小麦5 067公顷,平均单产为478千克/667米~2,其中达到500千克/667米~2以上的3 533公顷,450千克/667米~2以上的1 467公顷,实现了大面积高产稳产,创历史最好水平。一、选地与整地1.选地合理轮作,避免重茬,同时选择土层深厚、肥力高、有灌溉条件、杂草少、有机质含量在1.5%左右的土壤为佳。碱解氮大于50毫克/千克,有效磷大于20 相似文献
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利用Sos招募系统(SRS),通过聚合酶链反应(PCR)扩增羊布鲁菌16MVjbR基因的编码序列,定向克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵重组质粒pSos-VjbR,经测序正确后其将转入酵母菌cdc25H(α)感受态细胞,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无自激活作用。结果表明,经序列测定证实重组诱饵质粒pSos-VjbR构建成功。重组质粒转化入酵母细胞后,经检测其表达产物对cdc25H(α)酵母细胞无毒性作用,对报告基因亦无自激活作用。这为利用SRS来研究与羊布鲁菌16MVjbR蛋白相互作用的蛋白奠定了基础。 相似文献