猪源H9N2亚型流感病毒HA基因的序列测定及真核表达

利用RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Zhejiang/7/2004(H9N2)(SW/ZhJ7/04)HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGS上,经酶切分析、PCR鉴定和测序验证,得到重组表达质粒pCAGGS-HA,之后将其转染293T细胞,48h后收集转染细胞样品,进行SDS-PAGE分析,结果显示HA蛋白获得了表达。经Western blot检测,结果表明pCAGGS-HA能够在体外瞬时表达具有免疫学活性的HA蛋白,通过免疫小鼠,对其免疫效果进行了初步研究。     

禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定

根据反义ＲＮＡ作用原理,以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５　ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因,反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中,命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ,用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选抗性克性,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ）,以巢式ＰＣＲ方法检测,以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３,表明已筛选出产毒的的克隆细胞质,得到重组逆转录病毒,为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。     

重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP对小鼠免疫保护性的研究

将重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP以不同免疫剂量接种BALB/c小鼠,通过检测小鼠免疫后的抗体以及抵抗H5N1亚型流感病毒攻击的保护对rAd-H5HA-EGFP的免疫保护性进行了评估。分别以108 TCID50、107 TCID50的rAd5-H5HA-EGFP免疫小鼠,初次免疫后3周进行加强,剂量为2×108 TCID50和2×107 TCID50,同时以接种rAd5-EGFP和PBS的小鼠作为对照。二免后3周,将各组试验小鼠随机分为2组,分别应用106 EID50的SW/FJ/1/01株和CK/HuN/77/05两株H5N1亚型流感病毒进行攻击。结果显示,重组病毒108 TCID50和107 TCID50的免疫剂量均能够诱导高水平的HI抗体生成,rAd-H5HA-EGFP免疫小鼠在受到病毒SW/FJ/1/01和CK/HuN/77/05攻击后,与接种腺病毒rAd-EGFP和PBS的对照组小鼠相比,没有出现明显的体质量减轻,攻毒后病毒在免疫小鼠体内的复制被完全或部分抑制,脏器内检测到的病毒含量明显低于对照组小鼠;免疫小鼠在受到CK/HuN/77/05毒株攻击时,没有出现死亡(0/5),而接种rAd-EGF...     

禽流感病毒神经氨酸酶的结构及其生物学功能

高致病性禽流感是由禽流感病毒(AIV)引起的一种急性传染病。AIV呈球形,有囊膜。其表面主要有2种糖蛋白,即血凝素和神经氨酸酶。其中神经氨酸酶具有重要功能,其对病毒的释放及病毒在感染细胞周围的扩散能力有很大影响。此外,神经氨酸酶对其周围的血凝素切割能力也有很大影响,从而在一定程度上可以导致病毒致病性的不同。神经氨酸酶是AIV中另一种重要抗原,抗神经氨酸酶的抗体可为机体遭受流感病毒攻击提供一定的保护力。因此,神经氨酸酶对AIV的生物学特性具有重要意义。     

猪流感病毒M基因实时荧光定量PCR诊断方法的建立

根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和Taq Man MGB探针,建立了SIV M基因实时荧光定量PCR检测方法.使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线.其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1个EID50,组间与组内重复试验变异系数分别为0.21%和0.65%,除SIV外,其他5种猪病病毒检测均为阴性,样品检测与病毒滴定及病毒分离结果的符合率均达到100%,该方法特异性强、重复性好,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法.     

上海—50型拖拉机液压系统的故障分析与排除

一、突然不能升降。当拖拉机在作业过程中,突然发生不能升降农具的故障时,千万不要急于拆卸,而是应打开检查窗(除检查油面高度外),用手扳动摆动杆,检查控制阀是否卡死在回油(下降)位置或中间(中立)位置。如操纵阀被卡死,可将液压油放出一部分,直到露出控制阀壳体为止。用木棒敲打控制阀壳体临近弹簧的位置.阀体卡滞较轻者故障可     

曲轴弯曲带来的后果

多缸柴油机发生烧瓦事故,极有可能引起曲轴弯曲。曲轴弯曲后,各缸的供油时间会发生不同程度的改变,从而造成燃烧条件恶化,工作不正常。由于发动机供油时刻的检查以一缸供油时刻为标准,因曲轴弯曲造成的供油时刻变化常常被忽视。     

H5亚型禽流感病毒不同毒株及抗原含量对灭活疫苗效果的影响

本试验针对禽流感病毒（AV）不同毒株及捩的含量的灭活疫苗对仔鸡保护性的影响作了探讨，数组4周龄的鸡分别用10种H5亚型，一种异源H7亚型及正常鸡胚尿囊液制备的疫苗进行免疫，3周后滴鼻感染高致病力H5亚型AIV，结果所有10种H5亚型疫苗对鸡在临床症状及死亡率上表现了较好的保护力，AGP及HI抗体阳性，实验1中H5亚型疫苗免疫组80％的鸡体口咽部可分离到病毒，其中5个免疫组在鸡体泄殖腔中没有查到病毒，其它5组，泄殖腔中有病毒分布的鸡体数量明显低于正常尿囊液免疫组，与之相比，有些H5亚型疫苗免疫组中鸡泄殖腔及口咽部病毒分布的数量也明显减少，但减少的程度与疫苗株与攻毒株的HA基因序列同源性之间并不存在相关，随疫苗中所含病毒含量的递增，各项与保护性相关参数增大的幅度因疫苗毒株的不同而改变，A／Ty/Wis/68(H5N9)是所检测的H5亚型疫苗株中最好的一个，其平均免疫剂量（PD50）为0．006ug抗原，结果表明使用H5亚型AIV来活疫苗可以命名免疫鸡 在发病时的临床症状及死亡率上获得一定的保护，而通常不能阻止病毒的感染，这一点通过免疫鸡消化道内查不到病毒的存在可得以证实，某些免疫组可见泄殖腔病毒的检出率降低以及泄殖腔和消化道中的病毒分布数量减少，这些对减少环境污染及病原体在田间的传播具有一定的好处。     

劣质柴油引起的故障

一台上海—50型拖拉机的发动机,怠速运转正常,但在加速或高速运转时排气管喷火,并伴有强烈的爆炸声。机手认为燃油泵故障,到维修厂校正了燃油泵,更换了柱塞副,校对了供油时间,花费300多元,故障仍未排除。后     

不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)\[GS/GD/96\]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8 μg HA/0.3 mL（肌肉注射）、103PFU/100 μL（刺种）、106EID50/100 μL（滴鼻、点眼）、15 μg/200 μL（肌肉注射）等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒（HPAIV） GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护（不发病、不致死、不排毒）;在病毒攻击前,灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）所诱导的HI抗体平均水平分别为875log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。