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PRRSV和PCV-2二重PCR检测方法的建立及初步应用 总被引:1,自引:1,他引:0
参考GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒2型ORF1基因序列,分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的2对引物,扩增目的片段大小分别为421 bp和714 bp。在建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的单项PCR检测方法并优化单项PCR条件的基础上,建立了针对两种病毒的二重PCR检测方法。通过检测143份临床病料对二重PCR方法和单项PCR/RT-PCR方法进行了对比验证。结果显示,两者的总符合率在92.6%以上,表明该二重PCR检测方法可以用于临床病料的检测。 相似文献
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试验旨在筛选中药渣的适宜发酵菌剂并建立最佳发酵工艺,用来提高发酵中药渣中营养成分和生物活性成分含量。试验包含三个部分。试验一:采用单因素试验设计,利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)、酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,Sc)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,Bs)对中药渣进行单一菌剂、等比例两两复合和三者复合发酵,通过常规养分含量测定对其发酵效果进行营养价值评价,并筛选出适宜的发酵菌剂及复合类型。试验二:采用双因素试验设计,筛选发酵菌剂的最优添加比例。试验三:采用正交设计试验,分析初始水分含量(45%、50%、55%)、发酵温度(35、37、40℃)及发酵时间(24、48、72 h)对最优发酵剂处理后药渣内营养成分和生物活性成分含量变化的影响,优化工艺参数。结果表明:最优菌制剂为植物乳杆菌与枯草芽孢杆菌等比例组合,其最优添加比例为1∶1;最佳发酵工艺条件为初始水分含量为55%,发酵温度为37℃,发酵时间为72 h。黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)和呕吐毒素(Deoxynivalenol,DO... 相似文献
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为探明2011年我国猪群仔猪腹泻的病因,采用巢式RT-PCR方法对河南和辽宁省2个规模猪场采集43份出现腹泻的粪便进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(PRoV)的检测,结果表明:43份腹泻样品均为PEDV,没有检测出TGEV和PRoV。对扩增的PEDV进行测序和分析显示,这些PEDV流行毒株均属于基因G2.3亚型,彼此之间的同源性高达99.2%~100%,与2011年韩国和2008年泰国流行的PEDV毒株同属于一个进化分支。将其中3份病料在Vero细胞传代后接种2日龄仔猪,结果发现接种后13~57h内仔猪全部死亡,接种仔猪呈现典型的腹泻症状和病理变化特征,提示了这些PEDV流行毒株具有较强的致病性。 相似文献
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附红细胞体病是由寄生于多种动物红细胞表面、血浆、骨髓的多形性微生物感染引起的一种人畜共患病,以贫血、黄疸、发热为基本特征,其中家畜附红细胞体的感染率50%~90%,人群感染率达30%~70%,特别是临床兽医工作人员感染率更高,与病犬有接触史的人均有不同程度的感染,且人、犬的感染率不受季节的影响。近年来,各地宠物医院 相似文献
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羊痘病毒P32蛋白基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 总被引:6,自引:0,他引:6
应用PCR方法扩增羊痘病毒特异性蛋白P32蛋白的基因,将其克隆至pMD18-T载体,测定核酸序列后将P32基因克隆至Bac-to-BacR杆状病毒表达系统中转移载体pFastBacl和pFastBacHTa,进而转化人含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得两种携带P32基因的重组转染质粒:Bacmid-Bacl-P32,Bacmid-BacHT-P32,经PCR试验鉴定,获得的这两种重组转染质粒是携带P32基因的杆状病毒表达载体,可分别用于转染Sf-9昆虫细胞以获得单一重组P32蛋白和六聚组氨酸融合体重组P32蛋白. 相似文献