奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼几种谷胱甘肽S-转移酶基因克隆与分析

通过RT-PCR法和RACE法,分别从奥利亚罗非鱼(Oreochromisco aureus)肝脏获得alpha、rho1、rho2型GST(GSTA、GSTR1、GSTR2)基因cDNA全序列,从尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica)肝脏获得GSTR1、GSTR2基因cDNA全序列。结果表明:奥利亚罗非鱼GSTA基因cDNA全序列为933bp,5′非翻译区(5′-UTR)为98bp,3′非翻译区(3′-UTR)为166bp,开放阅读框(ORF)为669bp,编码222个氨基酸。奥利亚、尼罗罗非鱼GSTR1基因ORF均为681bp、均编码226个氨基酸;奥利亚、尼罗罗非鱼GSTR2基因ORF均为693bp,均编码230个氨基酸。氨基酸序列同源性比较和系统进化分析均表明,罗非鱼GST基因与鱼类GST同源性较高,与哺乳类、鸟类、两栖类GST同源性较低。     

广东从化无规定马属动物疫病区野鸟和蚊子分布及其西尼罗病毒感染情况调查

[目的]了解广东从化无规定马属动物疫病区野鸟和蚊子的种类、数量和分布等情况及其西尼罗病毒感染的情况。[方法]对鸟类在沿途设网抓捕取样;蚊虫采用紫外灯诱捕和网捕进行样品采集,随后利用荧光定量RT-PCR方法对西尼罗病毒进行检测。[结果]2012—2013年该地区共捕获鸟类110种381只,隶属于12目37科76属;共捕获蚊虫5种,共计3048只,其中淡色库蚊占50.66%、三带喙库蚊占32.12%、褐尾库蚊占12.99%、中华按蚊占3.61%和白纹伊蚊0.62%;对381份鸟泄殖腔棉拭子和3048份蚊子样品进行了西尼罗病毒的检测,结果均为阴性。[结论]虽然本次调查未发现鸟类及蚊子感染西尼罗病毒,但本地区存在西尼罗病毒引入以及在本地区传播的条件,存在西尼罗病毒病发生风险。因此,为继续维持广东从化无规定马属动物疫病区的无疫状态,有必要对媒介鸟类及蚊虫开展长期的调查和监测。     

香港活禽市场的管理措施

香港于1997年发生全球首例人感染H5N1禽流感事件,随后几年又陆续从当地活禽市场分离到H5N1高致病性禽流感病毒。为降低人和家禽感染H5N1等高致病性禽流感病毒的风险,香港根据相关的研究和调查,对活禽市场陆续采取了一系列针对性措施,并对所采取的管理措施进行了科学的评估,有效地控制了高致病性禽流感疫情。笔者对香港活禽市场的管理措施、实施的技术依据、实施后的效果评估等方面进行了综述,以期为内地调整活禽市场管理措施,降低人和家禽通过其感染H5N1等高致病性禽流感的风险提供参考和借鉴。     

特早熟高产优质棉花新品种辽棉34选育及栽培技术

主要介绍辽棉34的选育过程、生物学特性、产量、纤维品质、抗病性及栽培技术要点。     

多转座子载体的构建及转座特性比较研究

【目的】转座子（transposon, Tn）是染色体上可自主复制和移位的基本单位,普遍存在生物体基因组内,Sleeping beauty（SB）、piggyBac（PB）和Tol2分别来源于鲑鱼、甘蓝尺蠖蛾和青鳉鱼,是目前脊椎动物中活性较高的转座子。比较了这3种转座子在哺乳动物细胞的转染、插入和剪切效率,从而获得细胞水平上的高活性转座子系统。【方法】通过高保真PCR法分别从SB、PB和Tol2 3种转座子载体克隆3种转座子3′和5′端的转座元件,测序正确后,将各转座元件依次亚克隆至pT2-HB载体框架,构建成包含这3种转座子的多转座子载体pT3-PST。将绿色荧光蛋白表达框CAG-GFP和新霉素表达框PGK-NEO分别克隆至pT3-PST载体,获得两个表达载体pT3-PST-CAG-GFP和pT3-PGK-NEO。将这两个表达载体分别和转座酶表达质粒pCMV-SB100X、 pCMV-HAhyPBase、pCMV-Tol2以1﹕1质量比混合,经多聚阳离子PEI包裹,共转染小鼠胚胎成纤维细胞（3T3）,同时以突变失活的转座酶质粒SB△DD与转座子载体共转染作为阴性对照组。转染GFP 36 h后,用荧光显微镜进行检测GFP表达率,提取细胞基因组,以Amp基因作为内参,进行实时荧光定量PCR,检测GFP插入拷贝数;根据被剪切位置上下游序列设计引物,进行实时荧光定量PCR,检测3种转座子的剪切效率。细胞转染NEO 48 h后,用浓度为500 µg·mL^-1的G418进行耐药性筛选,至正常细胞基本全部死亡（10 d）,将细胞进行吉姆萨染液染色,统计耐药细胞数,从而比较各组转座活性。【结果】成功构建了多转座子载体PT3-PST、pT3-PST-CAG-GFP和pT3-PGK-NEO。实验组转染细胞效率均大于50%,且差异不显著（P＞0.05）。SB组GFP相对拷贝数高于Tol2和PB组,但差异不显著（P＞0.05）,均显著高于对照组（P＜0.05）。SB和PB组剪切效率显著高于Tol2组（P＜0.05）,但SB和PB组之间差异不显著（P＞0.05）。pT3-PGK-NEO与转座酶共转染3T3细胞,G418抗性筛选结果表明,SB组耐药细胞数显著高于PB和Tol2组（P＜0.05）,但PB和Tol2两组差异不显著（P＞0.05）,此3组均极显著高于阴性对照组（P＜0.01）。【结论】SB转座子系统在细胞水平的转座效率优于PB和Tol2,为细胞水平的转基因研究提供有效基因转移工具。     

广州及其周边地区马梨形虫病血清流行病学调查

为广东从化无规定马属动物疫病区建设的顺利进行和了解周边地区马属动物马梨形虫病的存在情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和涂片镜检的方法对广州、东莞和深圳的马属动物进行了马梨形虫病(马巴贝斯虫和驽巴贝斯虫两种虫体)的流行病学调查。结果表明,上述三个地区的马属动物均存在不同程度的马梨形虫病两种虫体的抗体,且出现同一个马场和在同一匹马同时存在两种虫体抗体的情况。对所有抗体阳性马匹进行涂片镜检未发现虫体,也未发现有马梨形虫病临床症状的马属动物。     

大约克公猪精液质量与粪便菌群的相关性分析

[目的]本试验旨在研究不同精液质量公猪粪便的菌群组成、睾酮及内毒素水平,分析粪便菌群丰度与精液质量、睾酮及内毒素的相关性,为通过调控公猪肠道菌群改善精液质量提供依据。[方法]依据试验前3个月的所有公猪精液质量参数,挑选33头日龄(479.33±2.85)和体况相近的大约克公猪,划分为低质量精液(LSQ)组(12头)和高质量精液(HSQ)组(21头)。采集试验公猪新鲜粪便进行睾酮和内毒素水平检测,并通过16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S rRNA)基因测序技术分析粪便的菌群组成。[结果]HSQ组公猪粪便睾酮水平显著高于LSQ组(P<0.01),内毒素水平无显著差异。HSQ组和LSQ组的公猪粪便菌群存在3个差异菌科和5个差异菌属。在科水平上,Eubacterium＿coprostanoligenes＿group在LSQ组中显著富集(P<0.05),Atopobiaceae和Akkermansiaceae在HSQ组中显著富集(P<0.05);在属水平上,g＿norank＿f＿Eubacterium＿coprostanoligenes＿group和...     

柑橘抗逆基因WRKY75的克隆与表达分析

[目的]低温、干旱、高盐等非生物胁迫严重限制柑橘的生长发育和地理分布.转录因子可以调控下游抗逆基因表达,在植物响应非生物胁迫的过程中起了重要的作用.WRKY是植物中重要的转录因子家族之一,其家族成员在植物抗逆过程中起着重要的作用.为研究WRKY转录因子在柑橘抗逆中的功能.[方法]以柠檬[Citrus limon(L.)...