鸡胰和十二指肠淀粉酶的提纯和性质

用硫酸铵沉淀、离子交换层析和亲和层析等方法,从鸡的胰和十二指肠中提纯了胰淀粉酶(P-Amyl)和十二指肠淀粉酶(D-Amyl).提纯倍数分别为67.5倍和78.8倍.二者提取液等电聚焦电泳鉴定均出现1条酶带,等电点分别为4.5和4.6.聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测定,二者的分子量均为53500.以可溶性淀粉为底物,测得P-Amyl和D-Amyl的Km值分别为6.20×10~-5和1.16×10~-5mol/L.P-Amyl对热敏感,D-Amyl则较稳定.EDTA强烈地抑制P-Amyl的活性,而对D-Amyl的抑制作用弱.P-Amyl和D-Amyl的最适pH分别为7.0和6.6.对P-Amyl和D-Amyl,Ca~(2+)、Mg~(2+)和Co~(2+)均有不同程度的激活作用,Cu~(2+)和Mn~(2+)有抑制作用;Zn~(2+)对P-Amyl有抑制作用;低浓度Fe~(3+)对P-Amyl有激活作用,高浓度Fe~(2+)对P-Amyl和D-Amyl均有抑制作用.     

马骨硷性磷酸酶的提纯和性质的研究

用正丁醇抽提、DEAE纤维素(DE—52)和Con.A—Sepharose 4B柱层析等方法从马骨中分离提取硷性磷酸酶(ALP)同工酶。提纯倍数为24倍。从DE—52柱层析中得到两个有部分交叠的酶活性峰。经等电聚焦电泳鉴别其pI值分别为4.22(酶峰Ⅰ)和4.18(酶峰Ⅱ)。两酶峰的热稳定性较差,于56℃作用10min,活性降低60％以上。作用于磷酸苯二钠的km值分别为25mM(酶峰Ⅰ)和6.67mM(酶峰Ⅱ)。尿素对酶活性的影响随着浓度的增高而加强,3M尿素对酶峰Ⅰ抑制达86％,对酶峰Ⅱ达71％。一定浓度的Mg~(2+)对酶有显著激活作用。Zn~(2+),Ca~(2+)激活不明显,高浓度时却有抑制作用。两峰对Ca~(2+)浓度变化有明显的不同反应。EDTA对酶抑制作用显著,Zn~(2+)、Ca~(2+)在一定浓度下对此抑制有轻度逆转作用。上述结果表明,马骨ALP至少有两种同工酶成分。它们不同的等电点、热稳定性差及对尿素敏感等特性,为临床检测马血清中的骨ALP提供了实验依据。     

不同品系鸡淀粉酶同工酶的遗传研究

采用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法研究了罗斯褐、星杂283、星杂579、艾维茵和印第安河等4个品系鸡血清以及星杂288、艾维茵、印第安河鸡羽毛的淀粉酶同工酶的遗传控制谱型、表型频率和基因频率。鸡的血清和羽毛淀粉酶同工酶谱分为A、C、D,B、C、D和A、B、C、D 3种类型的酶区带,并显示AA、AB、BB的表型特征,各品系鸡以AB表型频率最高;其次,罗斯褐、艾维茵和印第安河鸡为AA型;星杂238和星杂579鸡为BB型。显示A基因(Amy-1A)频率高的是艾维茵、印第安河和罗斯褐鸡,星杂579、星杂288则显示基因(Amy-1 B) 频率高。同一品系鸡的父母代(母系)和商品代(母鸡)之间的淀粉酶同工酶表型频率和基因频率者未见差异(P>0.05)。本试验建立了鸡羽毛淀粉酶同工酶的检测方法,此方法简便,测定结果与血清样品比较也未见差异(P>0.05),故可用羽毛代替血清测定鸡的淀粉酶同工酶。     

罗斯及印第安河鸡发育时期组织LDH同工酶变化

罗斯及印第安河鸡在胚胎第3d的混合胚中出现LDH_(1～3)3种同工酶(3条区带,梯度凝胶电泳),或LDH_(1～4)4种同工酶(6～7条区带,等电聚焦电泳);第7d检出心肌、胸肌和脑的5种同工酶(LDH_(1～5),5～7条区带);第12d检出肝脏的LDH_(1～5)5种同工酶(8或15条区带).组织LDH同工酶区带数随发育过程明显增多,同种鸡同一组织不同发育时期的LDH同工酶活性变化相差显著或极显著.在相同发育时期,印第安河鸡胸肌和肝脏的LDH_1相对活性均明显高于罗斯鸡(P<0.01).两种鸡心肌、胸肌、肝和脑组织LDH同工酶的等电点主要分布在pH6.0～8.2内.     

辽宁和内蒙古绒山羊血液蛋白质和酶多态性的研究及其与生产性能的关系

利用不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了辽宁绒山羊 (12 6只 )、内蒙古绒山羊二狼山品系 (48只 )、内蒙古绒山羊阿尔巴斯品系 (48只 )的血红蛋白 (Hb)、血清白蛋白 (Alb)、酯酶 (Es )、碱性磷酸酶 (Alp )和淀粉酶 (Am )的多态性 ;发现血红蛋白和血清白蛋白表现为单态 ,而另三种酶表现为多态。结果表明 :血清酯酶共有三种基因型 ,即EsAA、EsAB、EsBB ,受两个共显性基因ESA 和ESB 控制 ;碱性磷酸酶共有二种基因型 ,即Apf和Apo型 ,受两个基因Apf 和Apo控制 ;淀粉酶共有三种基因型 ,即AmAA、AmAB、AmBB ,受两个共显性等位基因AmA 和AmB 控制。各品系间Es、Alp、Am的基因频率有很大差异。AmAB型个体产绒量明高于AmAA和AmBB型个体 ;Apf型个体产绒量高于Apo型个体 ,酯酶只与出生重和双羔率有关     

纤维素酶的化学修饰

应用二环己基羰二亚胺活化海藻酸钠,然后与纤维素酶相联接.修饰后纤维素酶的性质发生了变化.其中,最适温度、最适pH均发生了变化;对pH、热稳定性有了较大程度的增强;对某些抑制剂(Hg~(2 )、Cu~(2 )、Ag~ 、Ca~(2 ))有较强的抵抗能力.     

蛋鸡输卵管碳酸酐酶的提纯和性质

通过电动匀浆、硫酸铵沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤、DE-23离子交换层析和Sulfamylon-Sepharose 4 B亲和层析等方法,从蛋鸡输卵管中提纯了碳酸酐酶(CA)。提纯倍数为171倍。提纯后经聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳鉴定其纯度,结果为1条蛋白带。测定CA分子量为29 800。该酶对热较敏感,于56℃下作用10min,其活性丧失65.5%;氨苯磺胺对CA有较强抑制作用,100μmol/L时使其活性几乎完全丧失;谷胱甘肽在0.5mmol/L时对CA有较微弱的激活作用,以后随着浓度升高则呈抑制效应;半胱氨酸对CA抑制作用较弱,50mmol/L时使其活性丧失10.14%;除Ca2+外,多种金属离子对CA均有不同程度的抑制作用,其中Cu2+、Zn2+、Ca2+、Se4+对CA抑制作用较强,Mn2+、Mg2+、Co2+、Fe3+对CA抑制作用较弱。Ca2+在10-5mol/L时可最大程度地激活CA使其IAR提高到117.7%,以后随浓度升高,激活作用逐渐减弱甚至呈抑制作用。