调控民猪Tβ4基因转录因子的筛选与分析

为了筛选调控民猪胸腺β4(Tβ4)基因转录的增强子,探究该基因的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tβ4基因启动子区系列截短片段,与pMD18-T载体连接构建克隆质粒;通过双酶切和连接反应将系列截短片段定向连入pGL3-basic载体构建双荧光素酶重组质粒;将重组质粒转染PK15细胞系,利用双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;根据相对荧光素酶活性的高低进一步筛选Tβ4基因的启动子核心区域;利用3个在线软件预测核心区域内的转录因子结合位点,根据预测结果,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点构建突变载体,在PK15细胞中以野生型载体为对照检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明,试验成功构建了6个Tβ4基因系列截短的启动子片段,其中5个片段具有明显的活性。经过两轮的双荧光素酶活性检测发现,-155～-105 bp区域为民猪Tβ4基因的启动子核心区域,经生物信息学分析发现,该区域存在E2F-1、MYBAS1和ELK-1转录因子的结合位点。利用定点缺失构建了3个转录因子缺失的突变载体,经双荧光素酶检测发现仅有ELK-1结合位点的缺失,会造成启动子活性的显著下降(P0.05)。据此推测ELK-1是民猪Tβ4基因转录的正调控元件。     

外源褪黑素对干旱胁迫下紫苏种子萌发的影响

以紫苏(Perilla frutescens(L.)Britton)为试材,利用聚乙二醇(PEG-6000)模拟干旱胁迫环境,分析不同浓度外源褪黑素对紫苏种子萌发特征(发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数)和幼苗生长(根长、子叶长、子叶宽和鲜质量)的影响。结果表明:干旱胁迫下紫苏种子萌发受到显著抑制,经过不同浓度的外源褪黑素处理后,发芽指标明显上升,其中处理T1(10%聚乙二醇+50μmol·L-1褪黑素)各项指标均达到最大值,发芽率为64.00%,发芽势为43.67%,发芽指数为17.62,活力指数为0.065。外施褪黑素同样可以缓解干旱胁迫下紫苏幼苗的生长,其中处理T3(10%聚乙二醇+300μmol·L-1褪黑素)效果最好,幼苗根长为7.45mm,子叶鲜质量为3.53 mg,长宽比为1.260。表明外施一定浓度的褪黑素能有效缓解干旱胁迫对紫苏种子萌发的影响,为干旱环境下紫苏种植栽培提供了参考依据。     

猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的分离培养

为了获得高纯度的猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,对猪子宫内膜进行胶原酶消化,分离基质细胞和腺上皮细胞进行体外培养,研究其生长特性.结果表明:猪子宫内膜组织在37℃、通过1 g/L胶原酶Ⅰ消化90 min可以获得游离的腺体,对腺体进行培养时上皮细胞比例可达70％以上.培养过程中采用差速消化和差速贴壁可以成功分离腺上皮细胞和基质细胞.基质细胞最适贴壁时间为25 min,腺上皮为3h.纯化的基质细胞生长迅速,可传5代以上,上皮细胞生长缓慢,并且成片脱落.     

池塘生态高效养殖青鱼技术

自2008年开始,我们在湖北省洪湖、新洲两地进行了青鱼池塘养殖数据调研和收录总结工作,分析两地青鱼池塘养殖的放养模式与技术特点,并经过两年的试验养殖,在品种放养比例、精准投饵技术、水     

我又走上了养蜂之路

赌气不再养蜂20年前,我和一位朋友养了几个月蜂,当时他有3箱意蜂,没资金发展,我投资了800元,自做蜂箱,合伙养蜂。那时,2块钱能买1斤肉,800元投资也不算小数了。1986年12月,我们开始喂养蜂群,     

FST基因的过表达对猪成纤维细胞内基因及生物学通路的影响

应用Illumina HiSeq测序平台,对过表达FST基因的细胞和正常细胞进行转录组测序,并对筛选的差异表达基因进行基因功能注释及信号通路分析。结果表明：过表达FST后共有286个基因的转录发生了变化,其中176个上调,110个下调。这些差异基因共得到44个GO功能注释,其中单一生物过程、代谢过程、细胞过程;细胞器、细胞区域、细胞和黏合terms下聚集的差异基因数量最多,均>100个。共发现9条显著富集的Pathway,包括与细胞增殖相关的细胞周期、DNA复制、碱基切除修复、p53信号通路等,与卵母细胞发育相关的卵母细胞减数分裂和孕激素介导的卵母细胞成熟通路。说明在成纤维细胞中过表达FST后,最显著的特征是与细胞增殖分化相关的基因和生物学通路被富集。     

民猪AMPD1基因的克隆与真核表达载体的构建

为了研究腺苷-磷酸脱氨酶1(AMPD1)基因多态性,试验采用比较基因组学与克隆测序相结合的方法对比分析民猪AMPD1基因的DNA及cDNA全序列,并构建pcDNA3.1(+)-AMPD1真核表达载体。结果表明:AMPD1基因的13个外显子上有20个点突变,第1外显子第39位碱基突变造成MsⅡ酶切位点的缺失,第1 367位碱基突变造成BspAⅠ、MgoⅠ、NphⅠ等31个酶切位点的缺失并且成功构建了pcDNA3.1(+)-AMPD1真核表达载体。     

猪黑素皮质激素受体-4基因(MC4R)启动子克隆及其分析

本研究旨在对猪黑素皮质激素受体-4基因(MC4R)的转录调控机制进行初步探讨.首先通过PCR方法扩增MC4R基因5’上游启动区l 234 bp(-1 264～-31 bp)的片段,再利用生物信息学方法对这一区域内潜在的转录起始位点进行了预测,最后采用步移缺失获得了11段长度不等的启动子片段,并分别克隆到荧光素酶(LUC)报告基因表达质粒(pGL3-Basic)中.同时,通过双荧光素酶报告活性分析检测MC4R基因启动子区不同长度片段在猪上皮型肾细胞(PK15)中瞬时转染后的活性.结果表明,猪MC4R 5’端-682 bp处存在1个潜在的转录起始位点(TSS),细胞检测结果显示-514～-486bp区域内存在控制MC4R基础转录活性的顺式调控元件,推测该序列内的热休克转录因子(HSF)结合位点可能对MC4R基因的表达调控及功能行使具有重要作用.     

水产养殖动物病情预测预报方法浅析

为了及时掌握水产养殖动物病害发生情况,采取有效防控措施,减少病害造成的经济损失,农业部渔业局在全国组织开展了水产养殖动物病情测报工作。通过几年的监测,取得了大量水生动物病害数据,基本掌握了水产养殖病害发生规律,为病害防治及预测预报积累了第一手资料,打下了一定基础。目前只能根据当年病害