8味中草药水提物对马红球菌的体外抑菌和杀菌效果研究

[目的] 筛选对马红球菌（Rhodococcus equi,R. equi）具有抑菌和杀菌效果的中草药。[方法] 选择黄连、黄芩、大青叶、鱼腥草、黄柏、连翘、金银花及板蓝根共8味中草药制备单味水提物,采用微量肉汤稀释法及平板涂布法测定中草药水提物对R. equi参考菌株103S及临床分离株的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。[结果] 不同中草药水提物对R. equi的抑菌及杀菌效果不同,其中,黄连、黄柏和连翘单独用药杀菌及抑菌效果显著（P<0.05）强于其他中草药水提物;黄连、黄柏和连翘不同组合联合用药对R. equi的抑菌及杀菌效果均优于单独用药,其中,“黄连+连翘”联用后药效呈相加作用。[结论] 黄连等中草药对R. equi表现出抑菌及杀菌效果,且联合用药效果优于单独用药,提示这些中草药制剂有望作为抗R. equi乃至其他耐药病原微生物感染的有效治疗药物。     

不同发酵水分及菌酶协同发酵对豆粕品质的影响

[目的]探讨不同发酵水分及菌酶协同发酵对豆粕品质的影响。[方法]①采用单因素试验设计，设置5个不同水分处理组，料水比分别为1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6、1∶0.7、1∶0.8，每个处理组3个重复；使用复合益生菌（枯草芽孢杆菌∶酵母菌∶粪肠球菌=1∶1∶1）发酵豆粕，通过测定分析发酵豆粕表观特征、营养指标及活菌含量，确定最适料水比。②采用单因素试验设计，设置5个不同中性蛋白酶添加量处理组，添加量分别为0、100、200、400、800 IU/g，每个处理组3个重复，进一步测定发酵豆粕表观特征、营养指标、活菌含量及蛋白质亚基分布，确定最佳中性蛋白酶添加量。[结果]①不同料水比条件下，各处理组发酵豆粕粗蛋白水平无显著（P=0.074）差异，料水比为1∶0.6时粗蛋白含量最高，较发酵前提高了9.39%；随着初始发酵水分的提高，发酵豆粕pH值极显著（P<0.01）降低，乳酸含量及3种菌的存活量极显著（P<0.01）升高，1∶0.6组发酵后乳酸含量显著（P<0.05）高于1∶0.4组和1∶0.5组；复合菌的存活量在料水比为1∶0.8时最高，总量达到1.43×10⁹ CFU/g。结合上述试验结果并考虑工业化生产条件，选择料水比为1∶0.6作为最适发酵水分开展后续试验。②在料水比为1∶0.6条件下，不同蛋白酶添加水平对各组发酵豆粕粗蛋白含量的影响不显著（P>0.05），但随着蛋白酶添加量的增加，小分子蛋白水平线性提升，在蛋白酶添加量为800 IU/g的处理组中，<30 kDa范围内的蛋白质水平高达65.56%，较未添加组小分子蛋白质含量提高2.61倍；发酵豆粕中3种菌的存活量随着蛋白酶添加量的增加而降低，100 IU/g处理组枯草芽孢杆菌和粪肠球菌的存活量极显著（P<0.01）高于200、400、800 IU/g处理组，酵母菌的存活量极显著（P<0.01）高于400、800 IU/g处理组。[结论]选择料水比为1∶0.6并在底物中添加100 IU/g的中性蛋白酶协同发酵可有效改善豆粕的品质。     

菌酶协同发酵菜籽粕在动物生产中的应用及存在问题

通过菌酶协同发酵技术提升菜籽粕类饲料质量和营养价值，改善适口性，降低饲料中植酸和硫苷含量，增加菜籽粕类饲料替换常规蛋白原料豆粕的比例，可在一定程度上缓解养殖业中大豆粕等蛋白饲料原料成本不断提高的问题。分析发酵菜籽粕处理常用方法——微生物发酵法和酶解法的优缺点，介绍制备菌酶协同发酵菜籽粕类饲料所需的菌种和酶制剂种类，综述菌酶协同发酵菜籽粕的功效，阐述其在动物生产中的应用现状及存在的问题，以期为菌酶协同发酵菜籽粕在畜禽生产中的科学应用提供参考。     

重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法及免疫原性研究

[目的]探索重组布鲁菌Omp19蛋白的制备方法,评价其在实验动物中的免疫原性,为中试工艺放大奠定基础。[方法]利用摇瓶培养对重组Omp19蛋白进行原核诱导表达,对培养基类型、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导时的菌体密度等条件进行筛选;利用阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析对重组Omp19蛋白进行纯化制备;利用SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）对重组Omp19蛋白的纯度进行鉴定;利用动物实验评价制备的重组Omp19蛋白的免疫原性。[结果]摇瓶培养试验表明,重组布鲁菌Omp19蛋白较优的表达条件为：使用LB培养基,在菌密度OD_{600 nm}值为0.6~1.0时加入0.5 mmol/L的IPTG,于28 ℃诱导5 h;经3步纯化后,获得了高纯度的重组Omp19蛋白;免疫原性研究表明,经方法优化后制备的重组Omp19蛋白联合佐剂可以较好地刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体。[结论]优化了重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法,评价了其在小鼠中的免疫原性,为重组布鲁菌疫苗的研发提供了实验基础。