鸡传染性法氏囊病病毒Gt株感染性分子克隆的构建

 【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）拯救平台，为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签（A节段：EcoR V酶切位点；B节段：PstI酶切位点）。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构（HamRz）和丁肝病毒核酶结构（HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游，构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT，LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞，进行病毒拯救研究。 【结果】 构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P12等3种细胞上高效拯救出病毒。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的IBDV，且存在分子标签。拯救毒在CEF上能产生特有的砂砾状CPE，且TCID50与亲本毒差异不显著，具有相似的生物学特征。【结论】构建的RNA聚合酶ⅢBDV拯救系统高效、稳定、简便、经济，且具有良好的细胞普适性。     

IBV地方分离株致病原性和血清学分型的比较

将６株分离自国内不同地方的ＩＢＶ流行株分别感梁ＳＰＦ鸡，对气管和肾桩进行系统病理观察，发现６株ＩＢＶ在至于致病原性和组织嗜性上存在显著差异，其中ＱＤ可引起严重的呼吸道损伤，并伴有相对较轻的肾脏损伤，其余５株对肾脏损伤较为严重地呼吸道损伤相对温和。用气管环组织培养交叉中和实验（ＳＮ）和ＳＡＳ软件对６株分离毒进行血清学分型研究，结果显示ＱＤ株属于Ｍ型，ＺＺ、ＧＺ属于Ｔ型，而ＴＪ、ＤＬ和ＹＣ株是不同于Ｍ     

鸡IFN-γ DNA壳聚糖纳米粒的制备及外源基因表达

为检测纳米载体对表达重组质粒的保护效果,本实验构建了鸡γ干扰素(IFN-γ)真核表达重组质粒pCAGGS-ChIFN-γ;并将其与200μg/mL壳聚糖醋酸溶液制备成DNA/壳聚糖纳米颗粒(CNPs)。透射电镜观察CNPs呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示CNPs的平均粒径为172.6nm±5.1nm;Zeta电位为20.8mV±2.9mV;CNPs重组质粒包埋效率和载药量分别为91.21%±2.54%和31.93%±0.16%。鸡胚成纤维细胞(CEF)体外转染实验表明:携带的外源基因能在CEF中释放、表达,其表达效率约为阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000转染后的16.3%,同时CNPs对细胞基本无毒性。CNPs稳定实验也证实其稳定性良好。     

表达水疱性口炎病毒G基因重组新城疫病毒的构建及免疫原性研究

水疱性口炎是由水疱性口炎病毒(VSV)引起的人兽共患性传染病,在我国尚无可用疫苗。为研制安全有效的水疱性口炎疫苗,本研究以新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统为基础,构建并拯救出表达VSV糖蛋白(GP)的重组病毒(rLa-VSV-G)。间接免疫荧光、激光共聚焦、western blot等试验证明VSV-GP在重组病毒中正确表达;体外致病试验结果表明,rLa-VSV-G保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度的鸡胚生长特性;rLa-VSV-G接种4周龄~5周龄BALB/c雌性小鼠后,可以诱导显著的VSV中和抗体反应。本研究表明,重组病毒rLa-VSV-G具有作为防控VSV储备性疫苗的潜力。     

传染性支气管炎病毒我国地方分离株病原性和基因分型的比较研究

对来自国内部分地区的６个分离株及３个参考株,以蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ,经反转录－聚合酶链式反应扩增了预期的１．７ｋｂ纤糖蛋白Ｓ１基因ｃＤＮＡ。     

犬瘟热病毒融合蛋白、血凝蛋白、基质蛋白和核衣壳蛋白基因DNA联合免疫的研究

为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因核酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真核重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM和p CAGG-CDVN;将其分别转染BHK-21细胞后通过间接免疫荧光试验表明,目的蛋白均获得正确表达。此外,将等量混合的重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM(3组份DNA疫苗)或重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM、p CAGG-CDVN(4组份DNA疫苗),分别以500μg/只经肌肉注射途径免疫A组(6只)或B组(6只)比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清CDV中和抗体。中和试验结果显示,A组和B组免疫犬,二免4周时,CDV中和抗体滴度平均值达到峰值,分别为6 log2和5.64 log2;在初免54周时,CDV中和抗体滴度均仍然维持5 log2。因此,3组份DNA疫苗为具有良好应用前景的犬瘟热候选疫苗。     

浅议我国兽医科学研究的发展方向

浅议我国兽医科学研究的发展方向步志高徐宜为（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨１５０００１）改革开放以来,我国的兽医科学研究得到了迅速的发展,在引进、消化、吸收和跟踪世界先进科学技术,防制我国畜禽重大疫病等方面取得了举世瞩目的成就,为保障我国畜牧...     

红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立

为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。     

重组痘病毒表达裂谷热病毒囊膜蛋白及其免疫原性分析

裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起的烈性人畜共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为Gn和Gc,其中Gn为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究分别构建了表达RVFV囊膜蛋白G(n c)和Gn的重组痘病毒rVV-G (n c)和rVV-Gn。SDS-PAGE、Western blot结果表明分子量分别为56 Ku(Gn)、58 Ku(Gc)左右的重组蛋白在rVV-G(n c)和rVV-Gn哺乳动物细胞获得准确表达[G(n c)裂解为Gn和Gc],并具有特异免疫反应原性。以rBac-G(n c)和rBac-Gn感染的昆虫细胞裂解物为包被抗原,间接ELISA检测血清抗体结果显示,rVV-G (n c)和rVV-Gn免疫小鼠可诱导显著的Gn、Gc特异抗体反应,并且rVV-G(n c)免疫诱导主要保护性免疫原Gn特异抗体反应效果优于rVV-Gn。结果表明,表达全长囊膜糖蛋白重组痘病毒rG(n c)具有作为安全有效的重组病毒活载体疫苗的潜力,为RVF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。     

鸡IgMμ链在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及其反应原性的测定

IgM是机体初次体液免疫应答中最早出现的免疫球蛋白,其在血清中的含量会在首次接触抗原的几天内达到高峰,然后通过免疫球蛋白类转换作用转变为IgG而使其含量