利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin,LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列,并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段;将供体片段转化至ETEC K88,同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统,对LT基因进行敲除;通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株,并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示,λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段,CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除,最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明,K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失,并且生长速度比野生型菌株减缓,LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。     

基于CDIO的应用型本科实践教学模式改革与应用——以家畜环境卫生学课程为例

针对应用型本科实践教学中存在的教学内容与人才培养目标匹配度不高、专业特点反映不足、教学手段单一、考核方式重结果轻过程等问题,以家畜环境卫生学为例,引进CDIO教育理念,面向现代畜牧业生产实际,满足应用型本科动物科学专业要求,充实和改革课程实践教学内容,构建学生全程参与实验教学模式,完善基于实验构思、设计、运作及目标实现的全方位、全过程评价体系与考核方法,为培养畜牧生产类应用型人才打好基础,同时也为其他课程建设及同类高校课程实践教学模式改革建设提供借鉴。     

安徽省水稻条斑病菌种群的分离及其致病型监测

为了探明安徽省水稻条斑病菌种群的致病类型及分布情况,采用平皿稀释法对采自安徽省不同地区的水稻条斑病叶进行了病原细菌分离,通过PCR专化性检测方法对细菌分离物进行分子鉴定,并利用IRBB5、IRBB14、IR24、IRBB4、IRBB21和‘金刚30’等6个水稻鉴别品种,对获得的水稻条斑病菌种群进行了致病型监测。结果表明,从安徽省11个不同县市的水稻条斑病样中共获得72株水稻条斑病菌,来源于不同地区的水稻条斑病菌种群存在明显毒力分化,强毒性菌株和弱毒性菌株并存,且多数菌株与水稻品种间表现为弱互作关系,部分菌株与寄主存在强互作模式。依据其毒力差异可将其划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ等6个致病型。从本研究结果可以看出,安徽省水稻条斑病菌种群致病型分化明显,且水稻条斑病菌种群的毒力与地域分布具有一定的相关性。     

棉花根结线虫病病原生物学研究

棉花根结线虫病在我国未见详细报道.1982年5月～1984年12月,作者对浙江金华地区发生的棉根结线虫病作了调查,并在大田和温室进行了该病原的生物学研究。调查表明,该病主要分布于金衢盆地的金华、兰溪、江山、龙游、开化、衢州等6县、市的部分棉田.此外,浙江省萧山棉区也有少量发现。根结线虫主要侵害棉花幼苗根系,同时还危害棉田多种杂草和其他作物.病原线虫经鉴定为南方根结线虫(meloidogyne incognita);鉴别寄主试验结果,确认为该种的4号生理小种.在金华地区,此虫一年发生五代,主要危害期在4月中旬～10月中、下旬.在自然条件下,每代历期25～30天,影响历期的主要因素是温度.在粗砂型土壤中,线虫幼虫的密度较大.     

氟铃脲在家白蚁诱饵中最适量的室内外试验

氟铃脲是灭蚁灵被禁用后诱饵剂中的取代药品．它是昆虫几丁质合成的抑制剂．2002～2003年室内试验表明，以松锯木粉为基本原料的饵料中，氟铃脲与饵料的质量分数为0．50％时．对家白蚁均无拒食作用；野外试验质量分数为0．25％时，无拒食作用，0．50％时有拒食作用；野外试验还显示家白蚁对该药的敏感程度远高于黑翅土白蚁及黄翅大白蚁对药剂的敏感性．据此建议在生产中用诱饵法防治家白蚁时．氟铃脲与饵料的质量分数以0．25％为宜．     

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法快速筛查虾中38种农药残留

[目的]利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术建立虾中38种农药残留的快速筛查方法.[方法]采用50％乙腈水溶液作溶剂、QuEChERS提取盐包和Oasis PRiME HLB固相萃取载体作吸附剂,实现了虾肉样品中38种目标物的同时提取和有效净化.目标药物经ACQUITY UPLC HSS T3(1.8μm,21 mm×50 mm)色谱柱分离,以10 mmol/L乙酸铵-甲醇和0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,使用电喷雾离子源,在正离子模式下进行全扫描,可在10 min内实现38种农药的良好分离.[结果]虾中38种农药的定量限(LOQ)为0.5～1.5μg/kg;3个加标水平的平均回收率为71.4％～97.9％,相对标准偏差(RSD)为4.1％～7.6％.[结论]该方法简便快速、灵敏度较高,可用于虾中38种农药的快速筛查.     

应用Sentinel-2A卫星遥感影像估测森林蓄积量

为了探讨应用Sentinel-2A遥感影像进行森林蓄积量估测的可行性,以内蒙古自治区某林业局的一类清查样地数据、二类调查小班数据、数字高程模型(DEM)以及林地数据为数据源,以遥感影像的波段灰度信息、比值波段及地形信息为自变量,采用k-近邻法(k-NN)、稳健估计及偏最小二乘估计等方法,分林型构建研究区域的森林蓄积量估测模型,从林业局、林场及小班尺度进行估测精度评价.结果表明:k-NN方法在林业局、林场和小班等3个尺度中的估测精度分别达到了97％、93.2％和83.6％,均表现出良好的估测效果;稳健估计法在3个尺度中的估测精度分别为89.3％、72.4％、69.3％;偏最小二估计法在3个尺度中的估测精度分别为85.7％、75.8％、71.7％.k-NN方法估测效果明显优于稳健估计方和偏最小二估计法,因此,Sentinel-2A遥感影像能够有效应用于森林蓄积量估测.     

荒漠草原植物群落特征对碳氮添加的响应

研究外源碳、氮添加对荒漠草原植物群落特征的影响,对荒漠草原退化草地生态恢复具有重要指导意义.本研究结果表明:群落物种多样性指数对氮肥的响应比对碳肥敏感,并随着氮肥的施加而降低;碳肥增加群落地上生物量,尤其是在高浓度碳肥处理下地上生物量比对照增加3倍,而氮肥会降低群落生物量.碳氮配施下,对物种多样性无显著影响,但对群落生...     

萝卜硫素特性及制取技术研究

萝卜硫素(1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷)是蔬菜中发现的活性最强的抗癌成分,具有很高的研究价值和市场前景,阐述了萝卜硫素的前体物质硫代葡萄糖苷在十字花科植物中的分布规律及检测方法,并就萝卜硫素的理化性质、检测及分离纯化技术等方面进行系统分析,为萝卜硫素生物制取和深加工利用提供理论与技术借鉴。