结核分枝杆菌复合群耐药性研究进展

<正>结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculo-sis complex,MTBC）的成员包括结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）、牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis,bTB）、非洲分枝杆菌（Mycobacterium africanum）、田鼠分枝杆菌（Mycobacterium microti）和山羊分枝杆菌（Mycobacterium caprae）等。其中结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别是人结核病、牛结核病的主要病原菌。至今,结核病仍是威胁人类社会及畜牧业发展的重要人兽共患传染病。     

非洲猪瘟或推动我国养猪行业的规范运行

多年来,我国畜牧管理部门和海关严防死守,意将非洲猪瘟等外来病挡在国门外。可是,2018年8月,该病毒突破防守,闯入我国,进而从东北蔓延到河南、江苏、浙江等地,对我国养猪业造成了极大的威胁。面对新来的疫病,沉着冷静、认清形势、做好防控才是目前的不二选择。     

脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）在结核病诊断中的应用

脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomannan,LAM）是结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）细胞壁的组成成分,是一种糖脂,可使巨噬细胞失活,并清除氧化自由基。LAM存在于结核病患者的尿液、血清和肺部,因此人们开发了以LAM作为生物标志物的床旁检测（point-of-care-testing,POCT）方法,以减少诊断延迟,及时采取相应干预治疗措施阻断结核病传播。与检测单纯结核病患者相比,LAM检测技术对于诊断晚期免疫缺陷和CD4细胞计数低的艾滋病病毒（HIV）感染相关结核病患者具有更好的敏感性,对于这部分患者以及无法产生痰液的儿童、重症结核病患者等具有较好的应用价值。本文通过介绍LAM的结构、功能及其在结核病诊断中的应用研究进展,以期为未来结核病防控提供参考和思路。     

表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定

本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组,得到pAd-ASFV-P72重组质粒;重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,连续传代后获得重组腺病毒。结果表明,获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×10~9 IFU·mL~(-1);经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达,且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72,不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础,还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。     

猪塞尼卡谷病毒病现状与未来防控思考

最近研究发现,塞尼卡谷病毒(SVV)是引起猪原发性水疱病(PIVD)的主要原因,可导致感染猪的鼻吻、蹄冠部出现水疱性病变,新生仔猪死亡。近年来,猪塞尼卡谷病毒病陆续波及加拿大、美国、巴西、中国、泰国和哥伦比亚等国,值得高度关注。本文介绍了猪塞尼卡谷病毒病的发现、流行现状及临床表现。提示我国应重视该病的防控工作,具体措施包括:建立健全动物水疱性疫病诊断处置方案;做好追溯研究,加强主动监测;分析病毒基因分子进化规律,关注SVV演变;继续进行病毒致病机制及宿主抗感染免疫机制等基础研究;制定SVV诊断国家标准,同时开发快速、灵敏、方便的现场诊断方法及高通量鉴别诊断方法;研制新型安全有效的SVV疫苗;加强饲养管理,提高生物安全水平。     

非洲猪瘟病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立

非洲猪瘟是一种跨境动物疫病,对世界养猪业危害严重。目前,该病的流行范围越来越广。为防止该病传入我国,当前急需建立快速、简便、可靠的检测方法。本研究通过分析非洲猪瘟病毒B646L基因保守区域,设计并合成了特异性引物和exo探针,建立了检测非洲猪瘟病毒的实时荧光RPA方法。利用该方法可在20 min内完成检测过程,最低可检测到16拷贝/反应;与猪的其他常见病原核酸无交叉反应;与荧光PCR方法具有相似的灵敏度和特异性;利用该方法对100份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究所建立的非洲猪瘟病毒实时荧光RPA检测方法具有简单、快速、敏感性高、特异性强的优点,在临床鉴别诊断、检验检疫和病原监测等方面具有广泛的应用价值。     

我国北方地区部分规模奶牛场Q热流行情况初步调查

为了解我国北方地区规模奶牛场的Q热流行情况,在7个规模奶牛场采集233份奶牛血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行Q热抗体检测;采集103份棉拭子,采用荧光定量PCR方法进行Q热病原检测。结果显示:从233份血清中检测到Q热阳性抗体34份,血清学阳性率为14.59%;从103份棉拭子样品中检测到Q热病原核酸12份,病原学阳性率为11.65%;7个规模奶牛场均存在不同程度的Q热病原感染,阳性率介于3%～33%。结果表明,我国北方地区规模奶牛场Q热流行较为广泛,应引起养殖场和相关部门的高度重视,有必要加强Q热的流行病学调查和监测以及新型诊断技术研发,以控制该病在动物间传播,降低人员感染风险。     

我国首例非洲猪瘟的确诊

2018年8月1日,辽宁省报告沈阳市一养猪户饲养的猪陆续发生不明原因死亡,病死猪剖检发现脾脏异常肿大,疑似非洲猪瘟病毒感染。国家外来动物疫病研究中心采集病料进行了检测,确诊为非洲猪瘟病毒核酸阳性,序列分析发现,其B646L/p72基因序列417个碱基与俄罗斯毒株100%匹配,与俄罗斯和东欧目前流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)属于同一进化分支。这是我国发现的首例非洲猪瘟。疫情来源有待进一步调查。     

多重数字PCR及其在疾病检测中的研究进展

数字PCR （dPCR）是一种新兴的核酸检测技术,继承了PCR和荧光定量PCR （qPCR）的优点,并开创了新的发展方向。dPCR最独特之处在于,它可以在无需标准曲线的情况下,对核酸样本实现绝对定量分析。而多重数字PCR （mdPCR）更是dPCR的主要发展方向。在众多研究领域中,特别是疾病检测方面,mdPCR已展现出卓越的优势和广阔的应用前景。本文介绍了dPCR和mdPCR的原理,探讨了mdPCR在细菌检测、病毒检测、癌症诊断等方面的研究现状,并深入分析了mdPCR的优势及不足,以期为未来mdPCR的应用提供重要的理论指导。     

一株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及其在巨噬细胞内存活能力的研究

为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性,本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份,将其涂布于布鲁氏菌选择培养基,分别在不含CO2和含7.5%CO2条件下37℃培养72 h,观察菌落形态,并经结晶紫染色,观察细菌类型。按照国家标准鉴定分离菌的生化特性。细菌分离结果显示,在不含CO2和含7.5%CO2的培养箱中2份流产犬全血样品在布鲁氏菌选择培养基上均长出边缘整齐、光滑的圆形菌落,透射光下,菌落呈浅黄色且有光泽;结晶紫染色结果显示分离菌为典型的粗糙型细菌;生化鉴定结果显示,分离株在TSA中的生长不依赖于CO2,且不产生H2S,氧化酶和脲酶试验均为强阳性。上述结果表明分离到一株犬种布鲁氏菌,命名为B. canis CQ3。对分离菌进行全基因组测序,利用MAUVE对分离株与GenBank中38株不同种的布鲁氏菌基因组进行比对,并构建分离菌全基因组的进化树。将不同种布鲁氏菌及分离株分别接种于TSB培养基中,通过测定不同时间的OD450nm值绘制各菌株的生长曲线。将各菌株及B. canis CQ3株分别以MOI 100感染小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,在感染后的不同时间(1 h、24 h...