犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的克隆分析

2006年从南京疑似细小病毒感染的病犬中分离犬细小病毒一株,分离的病毒培养物能凝集猪红细胞,凝集效价达到128倍,并能被已知的犬细小病毒阳性血清所抑制。其衣壳蛋白基因VP2被克隆并测序,核酸、氨基酸序列同源性分析表明:血清型为CPV-2b。通过软件对其氨基酸序列分析,预测VP2区域可能的B细胞表位分别为:5-30,300-320,360-380,380-400,400-420区段,这为犬细小病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

核酸水平检测犬副流感病毒方法的建立

根据GenBank中与犬副流感(CPIV)同源性较近的SV5病毒N基因保守序列,利用DNAStar软件设计了一对特异性引物,能扩增265bp大小的片段,并以此建立了检测CPIV的RT-PCR方法,实验证明该对引物特异扩增CPIV;不扩增犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的四种病原的核酸。检测临床病料20份,其中2分为CPIV阳性。此法敏感性较高。是检测犬急性传染性呼吸道疾病(CIRD)中CPIV的有效的方法。     

犬瘟热病毒RT-nested PCR检测方法的建立与应用

根据犬瘟热病毒（CDV）弱毒株Onderstepoort的核衣壳蛋白（NP）基因序列设计了套式引物，建立了RT-nested PCR检测方法。特异性试验表明，该法可以特异扩增出CDV NP基因片段，但从RNA病毒狂犬病病毒（RV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬冠状病毒（CCV），DNA病毒犬细小病毒（CPV）、犬腺病毒（CAV）及正常Vero细胞中均不能扩增出条带。敏感性试验表明，RT-PCR可以扩增10^-6稀释度的病毒RNA，而建立的RT-nested PCR可以扩增到10。稀释度的病毒RNA，后者的敏感性明显高于前者。用RT-nested PCR法检测了2006年我国东北地区临床表现犬瘟热症状的病例19例，检出率达90％，明显高于RT-PCR的检出率（45％）。部分病例扩增片段的测序结果表明，CDVNP基因出现个别碱基变异。研究结果表明，建立的犬瘟热病毒RT-nested PCR方法敏感、特异，适用于动物犬瘟热的快速诊断。     

犬副流感病毒血清抗体流行病学调查

犬副流感病毒(CPIV)属副黏病毒亚科茹布拉病毒属成员,是引起犬窝咳和脑脊髓炎的主要病因。CPIV对犬、狐的神经系统有较强的感染力,病情严重可导致患病动物死亡。CPIV常与细菌、病毒、支原体混合感染,使病情加剧,对犬养殖业危害较大。En-glund L等[1]采用血凝抑制试验对犬进行流行病学调查,结果表明28%的犬呈现阳性。为了解我国犬副流感病毒的流行病学情况,2004—2005年,笔者对部分省区犬科动物犬副流感病毒血清抗体进行了监测,现将结果报道如下。1材料与方法1.1血清样品犬血清154份,分别从吉林、长春、延吉、哈尔滨、沈阳等地区兽医站…     

犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法.在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5'和3'端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性.以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的iVP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1:20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0.采用iVP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,iVP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系.本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.     

水貂肠炎细小病毒灭活疫苗抗体消长规律的研究

应用血凝抑制试验对水貂肠炎细小病毒灭活疫苗免疫水貂进行抗体水平动态监测,结果表明,疫苗接种14 d抗体达到保护,21~30 d抗体水平达到高峰;免疫180 d抗体仍在保护值以上。攻毒试验证实,免疫180 d后90%免疫水貂获得保护,确定水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗免疫保护期可持续6个月。     

水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析

对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%～99.4%和98.6%～99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。     

蓝狐细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

为了鉴定从蓝狐粪便中分离的病毒是否为细小病毒,试验采用病毒培养、电镜观察、中和试验、间接免疫荧光试验和分子生物学试验对其进行鉴定。结果表明:分离毒株在F81细胞中培养96 h后出现细胞病变(CPE);电镜观察可见直径为20 nm左右的病毒粒子;该病毒能被水貂肠炎细小病毒(MEV)阳性血清中和;PCR检测可扩增得到大小为570 bp的特异性条带,并证明分离毒株为细小病毒,将其命名为BFPV-HeB05/16;VP2全基因遗传进化与氨基酸序列分析显示,分离毒株BFPV-HeB05/16与MEV和BFPV处在同一分支上,具有较高的同源性,其关键氨基酸位点(80,300,426,564,568位)与BFPV和MEV保持一致。     

2006年吉林地区野生鸟类禽流感病毒流行病学监测

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（AIV）所引起禽类的一种急性和高度接触性传染病，几乎所有的野生和家养禽类都可感染。2003年底从亚洲始发并席卷全球的高致病性禽流感疫情中，泰国等国家从多种死亡野鸟体内分离到了H5N1型禽流感病毒。2005年4月，我国青海湖中的近6000只斑头雁等侯鸟发生急性死亡，经病毒分离和鉴定，证实病原体为H5N1亚型禽流感病毒。因此，许多学者认为野生鸟类在传播禽流感病毒过程中扮演了重要角色。吉林省处于亚太地区候鸟迁徙路线上的重要位置，每年有大量的野生鸟类栖息和停留。为了解吉林地区野生鸟类禽流感病毒抗体的动态，2006年3月至2006年7月份对吉林市花鸟市场上的野生鸟类抽样进行血清学检测，为禽流感防控提供科学依据。     

水貂α-干扰素基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR方法从体外诱导的水貂外周血淋巴细胞中扩增出水貂的α-干扰素基因(MiIFN-α)。测序结果显示,水貂的IFN-α基因序列全长为564个核苷酸,共编码187个氨基酸,与GenBank上已发表的雪貂的IFN-α核苷酸序列同源性为97.5%,氨基酸同源性为92%。