链霉素金标单克隆抗体快速检测试纸的研制及其特性鉴定

建立了分泌抗链霉素单克隆抗体(STR mAb)杂交瘤细胞株并生产了STR mAb,采用胶体金免疫层析试验(GICA)技术成功研制出STR残留快速检测试纸(STR-Strip),并对其性能进行了鉴定.结果显示,目测检测限为12.5 μg/kg;与氯霉素等药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%.研制的快速检测试纸可以在10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合STR残留的现场快速检测.     

抗庆大霉素单克隆抗体的制备及其初步应用#br#

 【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM 单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定,;应用阻断ELISA试验原理组装GM-Kit,并对鲜奶中添加的GM标准样品进行测定。【结果】SDS-PAGE电泳鉴定表明BSA-GM人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-3;其中2号小鼠血清GM抑制效价较高且IC50最低,达17.28 ng•mL-1,融合后筛选出5E2-D7、1A3-A9、5E2-A12和2A6-B5共6株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1﹕1600、1﹕800、1﹕800和1﹕800,腹水效价分别为1﹕2.05×107、1﹕5.12×106、1﹕2.56×106和1﹕2.56×106,5E2-D7株对GM的IC50为0.30 ng•mL-1,与链霉素、卡那霉素等其他氨基糖苷类抗生素无交叉反应性;检测鲜牛奶样的平均添加回收率分别为96.0%,平均变异系数均低于15%。【结论】本试验获得了高效价、敏感、特异的抗GM mAb,为GM残留检测奠定了坚实的基础。     

浅析烟台海洋休闲渔业品牌战略实施的必要性

以品牌经营管理的角度阐述了烟台发展海洋休闲渔业的必要性及战略意义,从宏观、微观和战略全局三个方面对影响烟台实施海洋休闲渔业品牌战略的因素进行了研究。并分别从政府和从业者的立场出发,提出相应的建议和解决方案,以期加速实施烟台海洋休闲渔业品牌战略,进一步提升和增强烟台海洋休闲渔业的整体竞争力。     

γ-聚谷氨酸明胶膜对重金属离子吸附特性研究

利用蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)液体发酵制备γ-聚谷氨酸(Poly-γ-glutamic acid,γ-PGA),提取并制得γ-PGA溶液;以0.5 g/L的γ-PGA溶液与明胶交联制成明胶膜,未交联γ-PGA的明胶膜作空白对照,用原子吸收分光光度法检测金属离子消耗,研究γ-PGA明胶膜对Cu2+、Co2+的吸附特性。实验结果表明,Cu2+在pH为8、24℃、5 h时有最佳吸附量,饱和吸附量为12.34μg/mL;Co2+在pH 7、21℃、5 h时有最佳吸附量,饱和吸附量为19.50μg/mL;证实了γ-PGA与明胶交联制成的明胶膜具有吸附重金属(Cu2+、Co2+)的能力。     

响应面法优化香猪骨制备BMP的脱钙工艺

为优化制备骨形态发生蛋白(BMP)过程中脱钙的工艺条件,以香猪骨为原材料,HCl溶液为脱钙剂,在单因素试验基础上,选择脱钙时间、HCl浓度和液料比(mL:g)为自变量,脱钙液中钙含量为响应值,利用响应面分析法,研究各自变量交互作用及对脱钙效果的影响.结果表明,香猪骨粉脱钙的最佳工艺条件为脱钙时间50h,HCl浓度0.6...     

小麦-玉米轮作一体化保护栽培期间土壤微生物群落变化

以不同保护栽培方式和不同种植年限间小麦-玉米根际土壤为研究对象,对土壤微生物细菌、真菌、放线菌数量和多样性进行分析。采用微生物平板分离计数,SPSS统计学软件分析小麦玉米不同时期及5年间多样性指数变化。结果表明：小麦玉米轮作根际微生物数量变化与他们生长发育呈正相关,一体化保护栽培结果显示翻耕有利于增加细菌和放线菌数量,旋耕真菌数量显著增加,深松有利于减少真菌数量,覆盖秸秆有助于微生物数量的增加。微生物多样性指数受到小麦玉米长期轮作影响,导致微生物群落不均逐渐减少,但在轮作第5年小麦拔节期和玉米苗期微生物多样性指数升高。     

猪尿液中盐酸克伦特罗残留的ELISA法和GC-MS法检测

克伦特罗(Clenbuterol，CL)，是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂。其药理作用为松弛支气管平滑肌、增加肺活量、降低气道阻力、增强支气管纤毛运动和促进痰液排出，临床上常用于防治哮喘、肺气肿等呼吸系统疾病。但当其应用剂量达治疗量的5～10倍时，CL可增强肌肉发育，降低脂肪沉积，因此又称为“瘦肉精”，常被作为饲料添加剂非法用于肉用动物的生产之中。更为重要的是，由于CL在动物体内吸收快，分布广，脂溶性高，具有残留性积累和半衰期长等药理特性。人在食用残留CL肉品后引起的中毒事件不断发生。因此，各国政府都禁止CL作为饲料添加剂用于肉用动物的生产中，我国政府也规定严禁在饲料中添加CL。同时制订了CL的最高残留限量标准。为了建立快速、敏感、特异、快速的CL免疫检测方法，本研究应用ELISA法和GC-MS法对照检测饲喂盐酸克伦特罗育肥猪的尿液样品，以确证盐酸克伦特罗快速检测ELISA试剂盒的精确性和稳定性。     

猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究

通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体，对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究，从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应，与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特异性棕色着染，表明该单抗是针对猪瘟病毒的单克隆抗体，对研究猪瘟病毒在宿主细胞中的生命活动和繁殖定位有非常重要的意义。该单抗命名为YNF，培养上清液和腹水的抗体效价分别为1：80和1：10000。抗体蛋白属IgG类，亚类为IgG2／κ。     

血粉膨化机温度控制系统的研究

由于血粉蛋白属于硬质蛋白,只有膨化加工方法才能使其血细胞膜全部破坏及血粉中硬质蛋白未充分变性,从而被动物消化吸收。为了提高血粉膨化机挤出血粉的质量(在对挤压过程进行了分析和研究的基础上),采用Smith预估PID控制,实现了对血粉膨化机各区温度控制。实验结果表明:该控制系统具有较优的动态控制性能,使用效果良好。     

猪瘟兔化弱毒株E~(rns)基因在大肠埃希氏菌中的表达、纯化

将猪瘟兔化弱毒株Erns基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测,结果表明,融合表达蛋白的分子量约为55kD,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45%。表达蛋白与兔抗CSFV多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。利用GST亲和层析柱对Erns融合蛋白进行了纯化。