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91.
为分析蓝舌病Ⅰ型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25℃、诱导6 h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。 相似文献
92.
为得到可溶性表达的Cap蛋白并确定其抗原活性及存在形式,通过对IPTG浓度、诱导表达温度和时间进行优化,最终确定在OD600值为0.6~1.0时加入终浓度为1mmol/L的IPTG,37℃诱导4h为最佳的诱导表达条件。镍离子亲和层析对Cap蛋白进行纯化后,间接ELISA表明,重组Cap具有良好的抗原活性。非还原SDS-PAGE电泳分析表明,Cap重组蛋白除以26ku的单体分子存在外,还有一部分形成52ku的二聚体,为Cap病毒样颗粒的制备奠定基础。 相似文献
93.
基于cox Ⅰ基因对猪囊尾蚴河南分离株种系发育关系的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
利用RT-PCR技术从河南部分地域的猪囊尾蚴中获得10个分离株的cox Ι部分基因序列,其长度为344bp;将其克隆入pMD19-T并测序;分别用Clustal X 1.81程序对序列进行比对,然后用PAUP 4.0程序MP法和NJ法绘制种系发育树,并用PUZZLE 5.2程序构建最大似然树;同时利用WDANSIST 2.5程序和DNAstar 5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果表明,10个河南猪囊尾蚴分离株的coxΙ部分基因序列完全一致,属于猪带绦虫亚洲基因型;猪囊尾蚴coxΙ部分基因可有效区分出Asian和American/African两种基因型,并可用于不同种带科绦虫的鉴别诊断。因此,猪囊尾蚴coxΙ基因有望作为一种鉴别基因用于带科绦虫病和囊尾蚴病的PCR鉴别诊断。 相似文献
94.
鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种由病毒引起的雏鸡和青年鸡的急性接触性传染病,发病率和死亡率高,危害严重。近年来,由于毒株变异等原因,常常造成免疫失败。使用高免蛋黄液进行治疗,由于其质量差异较大,往往很难收到较理想的效果,给养鸡生产者造成巨大的经济损失。为了有效地控制此病,探讨防治IBD的新途径,我们进行了抗病促长剂防治鸡IBD的试验研究,报告如下。1 材料与方法1.1 试验动物 人工感染IBD防治试验用21~25日龄的非IBD免疫雏鸡;田间防治IBD试验为14~38日龄的雏鸡。1.2 强毒 从当… 相似文献
95.
非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)CD2v蛋白是病毒粒子外层囊膜上的糖蛋白,是介导病毒血细胞吸附和鉴定病毒血清型的关键蛋白,对于ASFV疫苗研发和疫病净化具有重要作用。为制备ASFV CD2v胞外区蛋白多克隆抗体,本研究以NCBI公布的China/2018/AnhuiXCGQ毒株的EP402R基因为研究对象,利用生物信息学软件进行分析,确定蛋白胞外区序列并进行同源性比对,将其进行密码子优化后克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建CD2v胞外区蛋白重组表达质粒His-CD2v-ex-pcDNA3.1(+),转染293 F细胞进行表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,重组蛋白在293 F细胞中以分泌形式表达,相对分子质量为63~89 kDa,能够与ASFV阳性血清特异性结合。利用Ni-NTA进行亲和层析纯化,将纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,通过Western blot、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其生物活性,结果显示兔抗ASFV CD2v胞外区蛋白多克隆抗体能够特异性识... 相似文献
96.
97.
98.
为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征及其遗传基因的稳定性,将猪乙脑病毒分离株CSF.XZ-2D在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代25次后病毒E基因趋于稳定,氨基酸位点E271(E→V)和E278(V→L)传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高,经连续传代后均未发生突变,与SA14-14-2相应位点完全一致。但是,另外一些位点的遗传稳定性较差,如E279和E312分别出现K→M→K和K→R→K→R的反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。 相似文献
99.
为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白。首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA1300上;再通过电极法将pCAMBIA1300-HA导入到根癌农杆菌EHA105中;然后用农杆菌侵染TP309水稻愈伤组织;最后经潮霉素筛选、分化、生根、移栽至田间种植。利用CTAB法提取叶片基因组DNA,PCR鉴定T0阳性植株;利用Dot Blot和Western Blot检测HA蛋白在水稻胚乳中的表达;提取阳性的T1叶片DNA,通过荧光定量PCR方法筛选纯合植株;利用温汤杀雄剪颖授粉法,将含有HA蛋白的TP309与低谷蛋白水稻杂交;利用Western Blot检测杂交后的T3植株蛋白表达量;利用双抗夹心ELISA方法比较水稻源和昆虫表达HA蛋白的活性。结果显示,成功构建了中间载体pMP3-HA和植物表达载体pCAMBIA1300-HA,且pCAMBIA1300-... 相似文献
100.
为探讨金芩蓝口服液对人工诱导和自然发病鸡风热犯肺证的治疗效果,以H9N2 AIV与脂多糖(LPS)为诱导因素人工建立鸡风热犯肺证,通过发病率、死亡率、临床症状等指标进行中兽医辨证来考察模型的建立情况;通过肛温变化、治愈率、有效率和无效率等指标考察金芩蓝口服液对人工诱发鸡风热犯肺证的疗效;将蛋鸡养殖场自然发病的600只200日龄的风热犯肺证患鸡随机分为两组,分别采用金芩蓝口服液与双黄连口服液进行治疗,观察记录采食情况和产蛋率,并计算治愈率、有效率、无效率和死亡率。结果显示,采用H9N2 AIV与LPS混合感染配合热应激的方式成功建立鸡风热犯肺证的动物模型;金芩蓝高剂量组治愈率和总有效率分别为90%、95%,金芩蓝中剂量组治愈率和总有效率为85%、95%,与模型对照组相比,皆具有极显著的统计学意义(P<0.01);而自然发病的鸡风热犯肺证病鸡,经金芩蓝口服治疗,治愈率达89%,总有效率达96.3%。结果表明,金芩蓝口服液可有效的治疗鸡风热犯肺证。 相似文献