鸡Igγ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达

将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igγ轻链基因中，并将鸡Igγ轻链信号肽与Pegfp—C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp—C1-SP。鸡Igγ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点，构建了带有信号肽的鸡Igγ轻链／GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后，荧光显微镜观察，重组鸡Igγ轻链／GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达，而载体pEGFP—C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明，牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。     

马立克氏病病毒编码的miR-M12-5p对鸡HVCN1基因表达的靶向调控

为研究miR-M12-5p在马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)感染过程中的调控作用,利用生物信息学方法对其候选靶基因进行预测分析,发现4个miR-M12-5p的结合靶点。体外双荧光素酶报告试验结果表明,miR-M12-5p可结合宿主鸡的氢离子电压门控通道1(HVCN1)基因mRNA的3'-UTR相应位点并发生特异性相互作用。实时荧光定量PCR分析进一步证实,miR-M12-5p能够在体内下调HVCN1基因的表达水平。上述结果表明,miR-M12-5p可以靶向调控宿主基因HVCN1的表达。     

传染性法氏囊病毒VP2蛋白的高效表达与免疫原性分析

为了实现传染性法氏囊病毒(IBDV)B87毒株VP2蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,将IBDV B87毒株VP2基因插入原核表达载体p ET-28a(+),构建重组质粒p ET28a-VP2,将其转化不同大肠杆菌基因工程菌株,通过IPTG诱导表达VP2外源蛋白。利用鸡传染性法氏囊病抗原快速检测试纸筛选,确定了BL21(DE3)为VP2可溶性蛋白的高效表达菌株。SDS-PAGE、Western blot分析表明,VP2实现了可溶性表达,且可溶性VP2蛋白具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白利用琼脂扩散试验(AGP)分析,结果表明,VP2蛋白的AGP效价达到1∶64。将重组蛋白免疫接种SPF鸡,制备的抗血清AGP效价可达1∶16,说明表达的B87毒株VP2蛋白免疫原性良好。     

猪囊尾蚴特异性单克隆抗体的制备及其识别抗原成分的鉴定

通过SDS-PAGE方法对猪囊尾蚴囊液抗原成分进行了分离鉴定,并分别分离纯化了其中的16 000和10 000特异性蛋白质成分;将16 000和10 000纯化蛋白质成分分别做成佛氏佐剂苗,分组免疫BALB/c小鼠,超免后,无菌取脾脏制备脾细胞,分别与NS0骨髓瘤细胞进行融合,经阳性筛选和特异性鉴定获得2株分泌猪囊尾蚴特异性单抗的杂交瘤细胞,命名为TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5。免疫学鉴定结果表明,单抗TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5与猪细颈囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫和蛔虫抗原间不存在交叉反应;单抗TSCF-1611H12B8识别囊液中16 000和10 000蛋白质抗原条带,而单抗TSCF-1012G5B5识别囊液中的10 000蛋白质条带。     

苯巴比妥多克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

苯巴比妥（Phenobarbital, PB）具有神经、骨髓、致畸、致癌等毒性作用,其在动物性食品中的残留严重危害着人们的健康,我国和世界上多数国家禁止PB用于食品动物.免疫学分析方法用于PB残留检测以其灵敏、快速、特异、简便等优点替代了传统的理化检验方法,美国雅培公司和德国Dade Behring公司已开发出相关产品.合格的抗体是建立免疫学分析方法的基础,关于PB多克隆抗体（pAb）的制备国内尚未见报道.本研究旨在制备出高价、敏感、特异的PB pAb,为免疫学检测方法的建立奠定基础。     

脑囊虫病抗体检测方法研究进展

囊虫病是由猪带绦虫幼虫——猪囊虫引起的一种重要的人畜共患病。猪囊虫可寄生于猪、野猪、人、骆驼、猫等动物的肌肉、大脑、皮下和眼部等多个器官等,能引起不同程度的发病。仔猪患该病后发育不良,肉品质下降。人感染囊虫会引起不同部位的病变,其中最为严重的是脑囊虫病,它主要是由于人摄入猪带绦虫虫卵或猪带绦     

磺胺甲口恶唑人工抗原的制备与鉴定

磺胺甲口恶唑(Sulfamethoxazole,简称SMZ)是一种中效磺胺类药物,其性质稳定、使用方便、价格低廉、具有广谱抗菌作用,在兽药临床中用于呼吸道和泌尿系统疾病的治疗,现多与甲氧苄啶合用,称为复方磺胺甲口恶唑(又名复方新诺明),抗菌作用可增强数倍至数十倍.磺胺甲口恶唑在畜禽疾病的控制和治疗中发挥着重要的作用[1],不合理使用使其残留对食品安全特别是动物源性食品安全和人类身体健康具有潜在危害性.因此,各国对磺胺类药物在动物性食品中的残留都有规定,美国和欧盟国家制定的动物源性食品SMZ最高残留限量为0.1 μg/g[2,3],我国农业部从2005年起,把畜产品中磺胺类药物的残留情况作为继盐酸克伦特罗之后的又一个重点予以监控.     

宿主膜联蛋白A2与伪狂犬病病毒US3蛋白互作及其对细胞凋亡的影响

US3蛋白激酶是伪狂犬病病毒（PRV）的一个重要毒力因子,研究显示US3参与了细胞骨架重排、病毒复制和传播、细胞凋亡和干扰素信号通路等多个生物学过程,鉴定新的和US3互作的宿主蛋白对于认识其生物学功能具有重要意义。本研究首先利用免疫共沉淀和pull-down技术验证了US3和宿主膜联蛋白A2（ANXA2）的相互作用;然后利用RNAi技术,通过荧光定量PCR、病毒滴度测定和免疫印迹分析,发现敲低ANXA2的表达显著抑制了PRV在PK-15细胞上的增殖;进一步发现过表达ANXA2可以抑制PRV或者凋亡刺激剂诱导的细胞凋亡,提示ANXA2具有负调控细胞凋亡的作用。本研究进一步完善了可以和US3蛋白互作的宿主蛋白成员,加深了人们对ANXA2生物学功能的理解。     

基于AHP法的延安城区乔木绿化树种评价与分析

为合理选择乔木绿化树种,促进延安城市生态环境建设,在实地调查和问卷调查的基础上,利用层次分析法(AHP法)对延安城区主要乔木绿化树种进行了系统分析评价.结果表明:(1)延安城区乔木绿化树种共53种,其中落叶树种明显多于常绿树种,乡土树种占乔木绿化树种的30％;(2)抗逆性的权重最大,明显高于观赏性和生长性,观赏性和生长性的权重差别不明显;(3)综合评价结果显示,87％以上的乔木树种评价等级为良和中等,为优和差的分别为3％、9％.因此,在今后延安城市绿化乔木树种的选择时,应加大乡土树种的比例,特别应注意重视树种的抗逆性,加强后期的养护和管理.     

泰妙菌素完全抗原制备及鉴定

为建立泰妙菌素(Tiamulin,TML)完全抗原制备方法,分别用混合酸酐法(Mixed anhydride,MA)和N,N-羰基二咪唑法(1,1′-Carbonyldiimidazole,CDI)将半抗原泰妙菌素偶联至载体牛血清白蛋白(Bovine serum albumen,BSA),以制备泰妙菌素完全抗原。对2种方法制备的抗原进行紫外扫描鉴定和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,根据SDS-PAGE凝胶电泳图估算出完全抗原的偶联比。结果均显示抗原偶联成功,估算出的偶联比分别约为1∶23.6和1∶8.1,说明,混合酸酐法制备泰妙菌素完全抗原时偶联率更高。