猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对20日龄SPF猪和20日龄猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）血清阳性猪，人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北京分离株（BJ－4）后48h接种猪瘟疫苗，利用ELISA方法检测仔猪针对PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫，利用MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原ConA的刺激反应。结果表明，不论是SPF仔猪还是带有PRRSV抗体的仔猪，在鼻内接种PRRSV后48h接种猪瘟疫苗，其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组，对有丝分裂原ConA的刺激反应也下降。由此说明，PRRSV感染使仔猪对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制。     

用免疫组织化学染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗原的研究

本试验用抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 单克隆抗体（ Ｓ Ｄ Ｏ Ｗ １７）建立了检测猪体内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的免疫组化染色法,主要步骤：组织块在１００ ｍ Ｌ／ Ｌ中性缓冲液福尔马林中固定２４～４８ ｈ→常规脱水、石蜡包埋、切片４～５μｍ →二甲苯脱蜡→１００％ 酒精→１０ ｍ Ｌ／ Ｌ盐酸酒精 ３０ ｍ ｉｎ（消除内源性过氧化物酶）→９５％ 酒精→８５％ 酒精→７５％ 酒精→蒸馏水→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ→１０％ 马血清３７ ℃３０ ｍ ｉｎ 后转４ ℃过夜→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→生物素化马抗鼠 Ｉｇ Ｇ（１∶２００） ３７ ℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３× ５ ｍ ｉｎ→辣根酶标记链亲和素（１∶２００）３７℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→新鲜配制的 Ｄ Ａ Ｂ室温下显色 ５～１５ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ洗→常规脱水、透明、封片。经对８ 例试验感染 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 仔猪各种组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的检测,本法具有简单、快速、特异性强,结果清晰、稳定及重复性好等特点,是检测组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的一种好方法。     

用PCR方法检测猪圆环病毒Ⅱ型

建立了一种能特异性地扩增猪圆环病毒 型 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )核酸片段的 PCR方法 ,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征 (PMWS)的感染病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的 PCV- 2 DNA片段 ,用限制性内切酶 Eco R 酶切鉴定了 PCR产物的特异性。 PCR产物的核苷酸序列分析表明 ,与已报道的 PCV- 2 (Gen Bank Ac-cession num ber AF0 2 72 17)相关区域的核苷酸序列同源性均大于 96 %。首次证实了我国猪群中存在 PCV- 2感染的PMWS。     

应用改良阻断ELISA检测禽网状内皮组织增殖病血清抗体

应用禽网状内皮组织增殖病病毒纯化抗原和抗ＲＥＶ单克隆抗体建立了改良阻断ＥＬＩＳＡ用于鸡血清中ＲＥＶ抗体检测，并对北京地区鸡群中随机采样的３６份血清样本进行了检测，阳性率为５．６％。与间接ＥＬＳＩＡ的检测结果进行了统计学比较，两种方法的阳性率无显著差异。结果表明本试验所建立的改良阻断ＥＬＩＳＡ可以用于鸡群ＲＥＶ感染的血清学调查。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4杉ORF3基因的原核表达

通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF3扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF3(deleting ORF3)。将dORF3克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-2，在E.coli BL21细胞中成功表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组蛋白GST-dORF3，表达产物以包涵体的形式存在，表达量为30．6％，Western-Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRS病毒次要结构蛋白GP3的免疫特性和功能奠定了基础。     

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。     

牛朊蛋白和酵母朊毒体结构域融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.     

鸡传染性支气管炎病毒SD060311株和GD080122(肾型)株的全基因组序列分析

通过对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分离株SD060311和GD080122(肾型)的基因组进行RT-PCR扩增和基因序列测定,结果表明其基因组大小分别为27 788 nt和27 407 nt,与已报道的IBV全基因组序列大小不完全一致,但基因组编码基因的顺序与已报道的IBV一致,均为5′cap-Replicase-S-3a-3b-3c-M-5a-5b-N-poly (A)3 ′.与已报道的IBV毒株和火鸡冠状病毒进行比较,绘制系统进化树,结果显示,SD060311和GD080122(肾型)分离株自成一支,与中国分离株BJ株和A2株的亲缘关系最近.本研究不仅丰富了冠状病毒的生物信息数据库,且为进一步研究IBV致病机理和变异机制等奠定了基础.     

猪繁殖呼吸综合征的防制——猪繁殖与呼吸综合征综述

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory svndrome，PRRS），又称“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）所致的猪的一种病毒性传染病，以妊娠母猪的繁殖障碍及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病为特征。自该病发生以来，给世界养猪业造成了巨大的经济损失，已成为全球规模化猪场的主要疫病之一。猪繁殖与呼吸综合征的控制一直是养猪生产国家所面临的艰巨任务，即使在养猪业发达的美国及西欧国家，也是一大难题。我国于1995年底在华北地区首先爆发该病，之后的数年问规模化猪场经历了由该病引起的“流产风暴”，因繁殖障碍给我国的养猪生产造成了极大的经济损失。目前，该病的流行特点与表现形式已有所变化，但对养猪生产的危害仍是第一位的。     

猪源和鼠源脑心肌炎病毒分离株基因组的比较分析

为了分析猪源和鼠源脑心肌炎病毒(EMCV)基因组的差异,对分离自同一猪场猪临床样本和鼠组织样本的2株病毒(GX0601和GX0602)进行了全基因组序列测定和比较分析.结果显示,2个分离毒株的基因组全长(包含poly A)分别为7 729和7 725 nt,核苷酸和氨基酸同源性均在99.8%以上.与国外毒株及国内已报道的分离株的序列比较结果表明,2个毒株与BJC3和HBl的核苷酸同源性为98.18%～99.41%,推导的氨基酸序列同源性为99.5%～99.7%,与国外分离株的核苷酸序列和氨基睃序列的同源性分别介于80.53%～99.57%和93.1%～99.5%.基于基因组开放阅读框推导的氨基酸序列的系统进化分析表明,我国分离毒株与国外毒株PEC9、CBNU、BEL-2887A/91和EMCV-R的同源性较高,位于同一个亚群.研究结果提示,猪源与鼠源毒株的基因组具有很高的同源性,鼠是猪场EMCV感染的传染来源.