猪miR-22前体上游序列突变的PK15细胞系构建

猪miR-22前体上游序列片段突变可能对miR-22的表达起到重要调控作用,为进一步探究其功能,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过针对猪miR-22前体上游序列片段设计2个靶标sgRNAs(short guide RNAs),构建重组表达载体pX459-sgRNA1和pX459-sgRNA2;随后将重组质粒转染猪肾上皮细胞系(PK15),经嘌呤霉素初步筛选后,提取基因组DNA,通过PCR及测序鉴定编辑效果;最后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测编辑前后miR-22相对表达量的变化。结果显示,81个阳性克隆中,共产生6种突变类型,突变率达60.49%;qRT-PCR检测显示,编辑后miR-22的表达量显著下调约50%。本研究成功获得了miR-22前体上游序列突变的猪PK15细胞模型,为今后猪miR-22的功能研究提供了新的可应用研究对象。     

光照通过褪黑素影响浙东白鹅肌肉生长发育的研究

为探索不同光照通过褪黑素(MLT)对浙东白鹅肌肉生长发育相关基因的影响,本研究分别在长光照和短光照2种饲养模式下随机选取4只40周龄浙东白鹅进行屠宰,提取腿部RNA,采用实时荧光定量PCR技术分析Pax3、Pax7、Myf5、Myf6、MyoD、MyoG基因在腿肌中的表达规律.同时发现不同光照下浙东白鹅体内MLT的含量...