荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究

利用RT-PCR技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增IFN-γ(ccIFN-γ)基因,克隆至pMD18-T载体进行测序。测序结果表明,ccIFN-γ基因全长501bp,编码166个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列,后面147氨基酸残基构成成熟肽,其中含有2个潜在的N-链糖基化位点。二级和三级结构预测发现,ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋,中间由无规卷曲连接,折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构。将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达出与预期大小(20.6KDa)相符的重组蛋白,占菌体蛋白18.6%。Western blot检测证实表达的融合蛋白为牛IFN-γ,这为进一步开展重组ccIFN-γ生物学活性的研究奠定了基础。     

偏远果园用改进干重法测定光合叶样杀青新技术

在实践中新近发明了能够在偏远果园用改进干重法测定果树叶片光合作用、对叶样就地杀青的两种科学实验技术—吹烫法、烘烤法。两种方法操作容易,实用方便,能取得满意的实验结果。适合偏远地区和基层单位开展果树光合作用的研究。     

树莓遗传转化体系的建立与优化

【目的】树莓遗传转化体系的建立对研究其基因功能、性状形成机制等方面的生物学探索和育种改良方面的研究具有重要意义。【方法】建立2套稳定的遗传转化系统,系统1为叶片直接分化丛生芽遗传转化受体系统;系统2为树莓叶片脱分化形成愈伤组织再分化成芽遗传转化受体系统。【结果】转化效率分析结果显示,系统1转化率为25%,是系统2的2.1倍,抗性筛选获得阳性植株时间是系统2的50%。【结论】系统1具有更高的遗传转化效率。     

片烟醇化过程中添加酶制剂对烤烟品质的影响

研究了醇化时期添加酶制剂A110对片烟化学成分、致香物质及感官质量的影响,结果表明,醇化效果为上部烟>中部叶>下部烟叶;加入酶制剂后烟叶醇化速度明显加快,6～10个月达到峰值,后酶制剂效果减弱;酶制剂样品总体较空白样品吃味要好,主要表现为杂气、刺激性减轻,香气细腻、协调;酶制剂不影响烟叶醇化的安全性,加入到烟叶中经打叶复烤后仍然具有活性。     

莱茵衣藻CrGPAT基因的克隆及分析

【目的】探究CrGPAT在莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)油脂合成中的作用。【方法】通过RT-PCR方法克隆了莱茵衣藻CrGPAT基因,对其理化性质、信号肽、蛋白结构域、高级结构进行分析,构建系统发育树。采用荧光定量PCR检测CrGPAT基因表达量。【结果】结果表明,CrGPAT基因编码区全长为1 233 bp,共编码410个氨基酸。GPAT相对分子质量为102 kDa,等电点为4.94,平均疏水性为0.805,脂肪系数为17.85,分子式为C₃₅₃₆H₅₈₄₁N₁₂₃₃O₁₄₄₂S₄₁₅,不稳定指数为45.30,属于不稳定蛋白质,为非分泌蛋白且不具有信号肽和蛋白跨膜区。二级结构预测表明CrGPAT蛋白由4种结构组成,其中α螺旋占43.17%,是CrGPAT蛋白最主要的二级结构。同时,系统发育分析表明,CrGPAT与团藻(Volvox)亲缘关系最近。【结论】CrGPAT能够在衣藻体内正常表达且在缺氮条件下表达量会显著提高,为进一步提高莱茵衣藻体内油...     

一种有效检测水稻叶鞘低丰度蛋白的方法

蛋白质组学研究中,低丰度蛋白的富集、检测和鉴定是主要的技术难题。植物组织中核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶(rubisco)等高丰度蛋白占细胞全蛋白很大比例,严重影响双向凝胶电泳(2-DE)对低丰度蛋白的检测。为探索一种适用于叶鞘低丰度蛋白的有效检测方法,本研究采用聚乙二醇(PEG)沉淀法以减少rubisco等高丰度蛋白,富集低丰度蛋白。以Mg/NP-40法为对照,分别使用15%和20%PEG分离水稻叶鞘可溶性全蛋白,并将对照和各PEG分离组分进行2-DE。2-DE图谱经软件分析结果表明,20%PEG沉淀法适用于灌浆期叶鞘低丰度蛋白检测。     

RinPKS1基因过表达载体的构建及遗传转化树莓

RinPKS 1基因编码的蛋白是具有催化合成柚皮素查尔酮和苯亚甲基丙酮的能力双功能酶,即具有CHS和BAS活性。BAS又是树莓酮生物合成途径中的关键酶。【目的】为了验证RinPKS 1在树莓酮生物合成途径中是否发挥作用。【方法】将RinPKS1基因与pCambia 1304连接,构建成植物过表达载体PCA-RinPKS 1,通过根癌农杆菌介导,将RinPKS1遗传转化入树莓中,以提高树莓中树莓酮的含量。利用q-PCR分别检测转PCA-RinPKS1和阴性对照(空载体)的树莓材料中RinPKS 1基因的表达量。【结果】转RinPKS1基因树莓材料中RinPKS1的表达量比转阴性对照(空载体)有很大提高,分别是根高出15.8倍;茎高出3.17倍;叶高出4.39倍。【结论】RinPKS 1在树莓中得到转录水平过表达。     

烤烟主栽品种总氮含量差异分析

[目的]探讨不同主栽品种烤烟总氮含量差异,为指导卷烟产业主要烟叶原料的种植、叶组配方及卷烟生产提供参考。[方法]选择生态条件相同、生产技术措施一致的基地单元,跟踪检测2012~2014年不同主栽品种烤烟总氮含量。[结果]不同品种烤烟总氮含量存在差异,具体表现为:K326云烟97云烟85。[结论]卷烟工业应根据产品原料需求特性有针对性地选择烟叶品种,在制定生产施肥方案时可参考不同品种烟叶总氮含量差异适度调整氮肥用量,有利于提高烟叶质量。     

我国主栽烤烟品种上部叶生长特征及差异研究

为研究不同烤烟品种上部叶的生长特征及差异,在相同栽培条件下,选用全国10个主栽烤烟品种云烟99、NC89、云烟87、翠碧1号、云烟85、K326、红花大金元、云烟97、龙江911、中烟100,通过田间调查和室内显微切片观察,对不同品种间上部叶的农艺性状和叶片组织结构进行研究和分析。结果表明,各品种的叶长、叶宽随着叶片生长时间的增加呈上升趋势,云烟87叶长、叶宽平均生长速率最快,而NC89、翠碧1号和红花大金元生长速率较慢,最终云烟87的叶长叶宽显著大于NC89、翠碧1号和红花大金元。各品种单叶质量的积累过程不同,云烟99在叶片生长前期积累较快,云烟87、云烟97、K326在叶片生长后期仍保持较高的积累速率,龙江911、中烟100全生育期积累速率都较高。各品种的叶片厚度差异显著,并且叶片厚度与栅栏组织和海绵组织的厚度呈显著正相关,在45 d时云烟87的叶片厚度显著大于其他品种,NC89、红花大金元、中烟100较薄,在45 d时中烟100的组织比和组织结构紧密度均最大,云烟87均最小。综合分析,可将NC89、翠碧1号和红花大金元分为一类,云烟97、中烟100、龙江911、云烟85、K326...     

基于化学成分和外观鉴定的山东烟叶感官评吸质量研究

[目的]为了研究山东烟区烟叶化学成分、外观鉴定和质量风格感官评吸评分三者间的相关性.[方法]取山东烟区2019年度71份烟叶样本,分别鉴定39个定量指标,并对741个指标进行相关性检验.[结果]55％的指标对间存在显著相关性,主要烟叶质量风格感官评吸指标均存在与之显著相关的烟叶化学成分指标或外观鉴定指标.[意义]研究为...