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携带猪传染性胃肠炎病毒S/N融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础。采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N。将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207(pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207(pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×109、1×109和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建TGEVS/N双基因疫苗SL7207(pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。 相似文献
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从经济、生态、社会等方面,分析会理县在金沙江干热河谷地区已建成6 666.7 hm2印楝50年的效益,阐述该县在发展印楝产业的潜在优势和成功经验,并对亟待解决的问题,提出建议。 相似文献
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85.
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几内亚比绍芒果遭受实蝇的严重危害,以入侵果实蝇为优势种。本文介绍了几内亚比绍的入侵果实蝇的发生危害特点及综合防治对策。 相似文献
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本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus, PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL-1。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 相似文献
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我国的畜禽血液年产量达到上百万t,营养价值极高,但利用率低、浪费严重。其中血浆蛋白营养丰富,可发展潜力大,需更多地探索研究。本研究通过鸡血浆蛋白经150 W固定频率超声处理0、5、10、20、30 min处理后,利用SDS-PAGE探究鸡血血浆蛋白的亚基组成,圆二色谱研究蛋白质的二级结构,荧光光谱分析蛋白质分子构象的变化,表面疏水性测定超声波处理对疏水基团的影响,自由巯基含量测定蛋白质的变性程度、粒径分布,研究超声处理对血浆蛋白的分解作用,Zeta电位仪测定表面电荷来研究血浆蛋白的稳定性及扫描电镜研究蛋白质微观表面结构等,全面透彻地研究超声处理对血浆蛋白的影响。结果表明,不同时间的超声处理不会破坏鸡血浆蛋白的亚基组成和二级结构,但会显著影响蛋白的三级结构、表面性质、粒径分布和表面微观形态。同时,超声波会引起蛋白质分子间的相互作用从而使自由巯基含量因先暴露增加后又被部分包埋而减少,经过超声处理的血浆蛋白平均粒径明显低于未超声处理的样品,疏水性先增加后因亚基聚集而减弱并保持稳定。本试验为扩大血浆蛋白的应用提供了一定的理论依据。 相似文献
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本研究旨在对比不同的分离与培养方法体外培养猫角膜缘干细胞(feline limbal stem cells, FLSCs)的效果,建立使FLSCs持续稳定增殖、结构及功能正常的最佳分离与培养体系。在手术显微镜下活体采集猫角膜缘组织,分别使用组织贴壁法(T法)、混合酶消化法(N法)、混合酶消化法联合组织贴壁法(NT法)分离FLSCs,鉴定LSCs标志蛋白ABCG2,以筛选最适分离方法。用BC培养基、DLM培养基和SCM培养基进行细胞培养,连续7 d细胞计数、观察细胞形态,选取LSCs的阳性标志物p63、波形蛋白和上皮分化标记物CK3、CK12定性分析第3、4、5代培养细胞。结果显示:3种方法分离的细胞中,ABCG2均呈阳性表达,NT法表达最强,表明3种方法均可分离FLSCs, NT法消化分离效果最好。3种培养基均可培养FLSCs,细胞形态无差异,细胞在DLM组中增殖速度最快,更快到达细胞生长峰值,与其他两组比,差异显著(P<0.05)。FLSCs生长曲线图呈典型“S”型,前72 h为迟缓期,72~216 h为对数生长期,216~264 h则基本处于平稳期,从264 h开始进入衰亡期... 相似文献