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151.
为了解近年来云南省师宗县蓝舌病病毒流行情况,2012年在师宗县五龙乡建立了10头蓝舌病血清学阴性黄牛的监控动物群。从2012年5~10月,每周采血1次,11~12月,每月采血1次,采用C-ELISA进行血清学监测。8月开始动物血清学检测结果转阳性,至11月,监控动物全部转为阳性。用转阳前1周、转阳本周、转阳后2~13周的经处理的红细胞静脉接种鸡胚,收获鸡胚肝脏,用PBS悬浮捣碎的鸡胚肝脏,上清接种于C6/36细胞一代、BHK-21三代后,出现细胞病变(cytopathic effect,CPE)。采用RT-PCR方法,针对蓝舌病较为保守的血清型群特异片段VP7设计了2对引物,扩增其相应片段。结果显示,共分离到86份疑似分离物,其中67份疑似分离物细胞培养液上清经RT-PCR扩增,均扩增出1156 bp片段,初步确认为蓝舌病病毒。采用国际24个蓝舌病标准毒及24个标准阳性血清对86份疑似分离物及其对应血清进行细胞微量中和试验,67份毒株为蓝舌病病毒,与RT-PCR结果一致。通过对2份经中和试验定型为BTV-1、BTV-16分离株的VP2基因测序分析发现,BTV-1株序列与同型Y863(登录号:KC879616)参考毒株的同源性为92%,BTV-16株序列与登录号为AB686221的毒株同源性为99%。结果表明共分离到67株蓝舌病毒株,分离株主要为BTV-1、BTV-9、BTV-16三个血清型。 相似文献
152.
本实验旨在研究过表达miR-665对绵羊黄体细胞类固醇激素调节基因StAR、3β-HSD表达水平以及孕酮(P4)分泌水平的影响。通过miR-665模拟物及阴性对照物与绵羊黄体细胞共转染,设置空白对照组,48h后在不同转染组中分别检测miR-665的表达水平和StAR、3β-HSD的mRNA、蛋白表达水平及P4分泌水平变化。结果表明:与空白对照组和阴性对照组相比,miR-665模拟物组中miR-665的表达量极显著升高;同时,孕酮合成关键基因StAR、3β-HSD的mRNA和蛋白表达量极显著增加,分泌水平极显著升高。综上,过表达miR-665能够促进黄体细胞内StAR、3β-HSD基因表达和P4分泌,其在绵羊黄体内分泌功能调控过程中发挥重要作用。 相似文献
153.
154.
旨在研究前列腺素家族中生殖领域鲜有报道的PGD2成员对单一环境下黄体细胞内分泌功能及其凋亡相关基因表达的影响,并解析其在黄体退化中的作用机理,为全面探析前列腺素家族成员的生物学作用提供新的理论依据。采集空怀母山羊黄体中期的卵巢组织,通过胶原酶II消化和胰酶差速离心法分离纯化以获得山羊黄体细胞。采用DMEM/F12进行离体培养,观察不同离体培养时间的黄体细胞生长状态;采用免疫组化法和细胞形态特征鉴定黄体细胞,将PGD2设置三个不同梯度确定其对黄体细胞作用效果的剂量依赖性关系。最后,通过PGD2最佳依赖性剂量处理黄体细胞,利用ELISA法检测黄体细胞的内分泌功能变化,流式细胞术测定黄体细胞的凋亡率及qRT-PCR/Western blot法检测凋亡相关基因mRNA/蛋白表达水平。结果显示,经突触素(synaptophysin, SYP)特异性表达蛋白鉴定,成功分离并获得了山羊原代黄体细胞。细胞形态实时观察和ELISA检测结果显示,离体培养5 d时黄体细胞胞质饱满、外形紧凑、形态清晰可见,并且黄体细胞的内分泌P4 相似文献