应用DGGE技术分析流清河湾扇贝养殖海区细菌群落结构的季节变化

细菌是海区生态环境的重要组成部分,为了解扇贝养殖海区细菌群落结构的季节性变化,连续11个月(2009年5月—2010年4月,2月除外)定期采集青岛流清河湾扇贝养殖海区水深0.5 m处水样,过滤收集粒径0.22～3.00μm的微生物,采用CTAB法提取样品总DNA,PCR扩增细菌16S rDNA V3-V5可变区序列,并通过DGGE技术对所得序列进行分离,结果共得到36条不同位置的条带,1月份水样细菌群落条带数最为丰富,3月份水样的细菌群落条带数最少。基于各月份DGGE条带数目和相对光密度,对11个月份样品的细菌群落多样性进行UPGMA聚类分析,结果表明,3、4和5月份细菌群落多样性具有较高的相似性,优先聚为一支,其余月份中,7月和8月,9月和12月,10月和11月分别优先聚为一支,而1月份和6月份均单独分为一支。剪切DGGE图谱中的20条主要谱带重扩增、测序,并进行BLAST比对。结果表明,20条序列与已知序列的相似性均在94%以上,这20条序列所代表的细菌分属于α-变形菌亚门(α-Proteobacteria)、β-变形菌亚门(β-Proteobacteria)、γ-变形菌亚门(γ-Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)和疣微菌门(Verrucomicrobia)。     

宁夏木虱种类调查

经调查发现宁夏木虱有52种,隶属5科24属。有5个属16个种是中国新记录。其中1个是新组合和中国新纪录。现报道52种木虱和它们的寄主植物、在我国各省的分布情况,并列出16个中国新纪录种或新组合的名录:①骆驼蓬隆脉木虱,②丁香李叶木虱,③白刺短胸木虱,④大斑短胸木虱,⑤梭梭胖木虱,⑥柽柳柽木虱,⑦水柏枝多斑明木虱,⑧水柏枝端斑明木虱,⑨水柏枝无斑明木虱,⑩盐蒿笠木虱,(11)猫头刺呆木虱,(12)木蓝幽木虱,(13)甘草豆木虱,(14)花棒豆木虱,(15)茶条械喀木虱,(16)柴胡依个木虱。     

大蒜遗传转化体系建立与CRISPR-Cas9敲除蒜氨酸酶基因研究

为了为大蒜转基因研究和蒜氨酸酶基因研究提供技术支撑和理论依据，本文首先建立了愈伤组织再生培养体系，在基因型、生长发育时期、植物激素配比和外植体来源方面对比MS、B5、N6和SH基础培养基，明确大蒜愈伤诱导和培养的最适基础培养基为MS和SH，其中以苍山大蒜根尖为外植体、培养基为MS+1 mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA是大蒜愈伤组织诱导的最佳组合；分化阶段为MS+3 mg/L 6-BA；生根培养和鳞茎诱导阶段则使用不添加任何激素的培养基。然后，通过对影响农杆菌介导遗传转化因素的筛选，得到最佳转化条件：农杆菌菌株选用LBA4404、侵染液组成MS/LB+100μM As+1%葡萄糖+1%蔗糖为宜，侵染时间10 min，共培养3 d，草铵膦筛选浓度为250 mg/L，在此条件下该方法的遗传转化率为1.68%。利用CRISPR-Cas9敲除技术，成功实现了对鳞茎蒜氨酸酶关键基因的敲除，突变体中目的基因m RNA的表达量和蒜氨酸酶活均明显下降。