基于网络药理学方法研究阿司匹林丁香酚酯防治犬心血管疾病的作用机制

试验旨在采用网络药理学方法探讨阿司匹林和丁香酚的靶点、基因富集和通路来推测阿司匹林丁香酚酯(AEE)防治犬心血管疾病的作用机制。首先从DrugBank数据库检索阿司匹林、丁香酚获得其作用靶点,进而构建化合物-靶点网络,再将其靶点上传至STRING数据库,物种选择犬,得到作用于犬蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,最后将作用于犬的靶点上传至DAVID数据库,物种选择犬,筛选出错误率0.01的基因富集和KEGG通路,从而构建靶点-通路网络图,用以推测AEE防治犬心血管疾病的作用机制。通过检索分析可知,阿司匹林和丁香酚已知的相应靶点有15个,其中8个靶点可作用于犬,关键靶点涉及TP53基因、NF-κB、雄激素受体、前列腺素G/H合成酶1;基因功能富集(GO)条目4个,其中分子功能2个,涉及甾体结合和转录因子活性、序列特异性DNA结合,生物过程2个,涉及到DNA转录模板和DNA模板转录的正向调节;KEGG通路2条,涉及前列腺癌和癌症信号通路。综上所述,推测AEE可能通过调控TP53基因、NF-κB、雄激素受体、前列腺素G/H合成酶1等靶点,基因功能富集于DNA转录模板、甾体结合、转录因子活性、序列特异性DNA结合、DNA模板转录的正向调控,通过前列腺癌及其他癌症信号通路来治疗犬心血管疾病。     

动物科学类硕士研究生高级生物化学教学实践与思考

在高等农业院校动物科学类硕士研究生高级生物化学教学中,调整充实教学内容,形成完整的现代生物化学知识结构体系;改革教学方法,优化课堂教学结构;重视实验课教学,加强研究能力培养,以达到开发学生智慧,培养学生能力的目的。     

微小牛蜱Bm86基因的克隆与原核表达

根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97%和95.6%.然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88 Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39%,表达量约为1.08 mg/mL.Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别.     

12种中草药对8种畜禽肠道病原菌的体外抑菌试验(简报)

采用平板打孔法和改良的试管二倍稀释法分别测定了12种中草药水提物对8种畜禽肠道病原菌的抑菌直径和最小抑菌浓度(MIC).结果表明:12种中草药水提物对8种供试菌既有不同的抑菌谱,又有不同的抑菌效果,抑菌圈的大小与MIC值存在一定的平行关系.其中,对8种畜禽肠道病原菌(大肠杆菌O2、O139、O8、O78、鸡白痢沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌)抑菌直径最大的分别为黄芩、乌梅、黄芩、艾叶、乌梅、黄芩、乌梅、乌梅;对上述8种病原菌抑菌效果最好(MIC最小)的分别为五倍子和诃子;五倍子;五倍子和黄芩;石榴皮、五倍子、黄芩、黄连和艾叶;黄芩和黄连;黄芩;石榴皮和五倍子;五倍子和黄芩.     

两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒的序列分析及致病性研究

本研究对2010年在湖北活禽市场监测分离到的两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒(AIV) (HuB/495/10和HuB/513/10)进行了序列分析和致病性试验研究,以了解湖北地区H5N1亚型AIV的生物学特性差异.序列分析显示:2株病毒全基因组核苷酸同源性在97.3 ％～98.6％,2株病毒的8个节段基因均与青海和香港分离的野鸟源病毒A/great crested-grebe/Qinghai/1/2009 (H5N1)和A/black-crowned night heron/Hong Kong/659/2008 (H5N1)的核苷酸高度同源,HA蛋白裂解位点序列基序为341RRRKR345,呈现典型的高致病力分子特征.以105 EID50/100 μL病毒剂量感染4周龄SPF鸭发现:HuB/495/10和HuB/513/10对鸭的致死率分别为100％和20％,病毒在鸭体内呈全身性复制并可通过呼吸道和消化道向外排毒;不同滴度的病毒感染6周龄BALB/c小鼠,HuB/495/10和HuB/513/10的MLD50分别为1.38 log10 EID50和1.68 log10 EID50,对小鼠表现为高致病力,均在肺脏中高拷贝复制.     

石榴皮等中药水提物体外抗菌活性试验

近年来，随着合成及半合成抗菌素的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，药物不良反应不断增加，而且开发费用昂贵。因此，从中药材中寻找开发纯天然抗菌素是一条可行途径。兽医界也有很多用中药治疗畜禽疾病或抑菌试验报道。国内从20世纪40年代开始了中草药的体外抑菌试验，主要以单味药为主，采用不同的材料和方法，从不同的方面对中草药的抑菌作用进行了多方面的研究，但大多数是以定性试验为主。水煎剂是中药传统剂型，单昧中草药抑菌作用的研究以水煎剂居多。该试验选用12种常见中草药分别对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、禽沙门氏菌进行体外抑菌实验，旨在筛选抑菌活性强的中草药，为临床用药提供参考及研制开发中草药制剂提供依据。     

三种中草药提取物对猪附红细胞体的体外药敏试验

研究了骆驼蓬子、常山、狼毒3种中草药提取物体外抑制猪附红细胞体的效果.结果表明:3种中草药提取物的高剂量组(4000μg·mL-1,2000μg·mL-1)5min后均可完全使附红细胞体从红细胞上脱落,红细胞感染率均为0;中剂量组(1000μg·mL-1)5min后可以使部分附红细胞体脱落,红细胞感染率为15%～30%;低剂量组(500μg·mL-1)无明显药效作用,5min后红细胞感染率仍为70%～85%;而对照组红细胞感染率为90%以上.表明猪附红细胞体对3种中草药提取物的中高剂量组较敏感,低剂量组不敏感.     

口蹄疫病毒L基因真核表达载体的构建及表达

采用RT-PCR方法,从口蹄疫病毒中扩增出长约600 bp的核苷酸片段.纯化后与载体pMD18-Tsimple连接,重组质粒经PCR鉴定及DNA测序,结果表明克隆的片段为口蹄疫病毒L基因.将质粒pMD18-L与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoLⅠ双酶切,将所获目的基因与带有酶切位点的载体连接,经酶切、PCR鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒pEGFP-L构建成功.将转染的BHK-21细胞,经荧光鉴定和RT-PCR检测,证实L基因在BHK-21细胞中得到表达.     

奶牛生殖激素分析 Ⅲ.发情周期外周血浆和乳汁中孕酮含量的变化

采用乳汁孕酮直接放射免疫分析法测定了10头黑白花奶牛外周血浆和乳汁孕酮在一个发情周期中的变化。奶牛在发情时,外周血浆孕酮值为0.21±0.03ng/ml,奶桶混合乳中的孕酮值为1.28±0.22ng/ml;在发情周期的第14天,血浆孕酮值升至6.51±0.74ng/ml,奶桶混合乳中的孕酮值升至14.19±1.29ng/ml。奶桶混合乳孕酮的含量为外周血浆孕酮含量的二倍,二者之间相关性和回归关系极显著(P<0.001)。