水貂阿留申病毒部分VP2基因的原核表达及免疫学分析

利用PCR技术扩增出水貂阿留申病毒(ADV)含有VP2抗原表位区的基因片段,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建出重组质粒pGEX-4T-VP2,并转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG法进行诱导表达。经SDS-PAGE凝胶电泳和免疫印迹分析显示有目的条带,并且在诱导6 h后表达量达到最高,随时间的延长表达量降低。本研究成功构建了pGEX-4T-VP2重组质粒,确定了VP2基因的优化表达条件,为阿留申病的免疫学诊断和疫苗研制奠定基础。     

卡介苗与结核菌野毒株的基因差异的研究进展

人类结核已经存在数千年之久,无一个国家能幸免于难,尤其是第三国家。人们在感染结核病的同时也能感染艾滋病,这给人类的健康带来了巨大的挑战。现阶段,预防结核病的唯一方法就是接种BCG-减毒牛型结核分枝杆菌活疫苗。该疫苗是在1908年,由Leon Calmette和Camile Guerin将一株牛型结核分枝杆菌强毒株经历13年230次传代培养,使其毒力发生变异,成为对人无致病性,而保持了良好的免疫原性的菌株。本文主要是探讨结核分枝杆菌,牛型结核分枝杆菌和卡介苗之间的基因的差异。为卡介苗的改良和结核病的检测提供有益借鉴。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鹿布氏杆菌抗体的研究

通过对布氏杆菌脂多糖抗原、超声波破碎抗原和离心抗原进行筛选和优化，确定超声波破碎抗原为最佳抗原，首次建立了检测鹿布氏杆菌抗体的间接ELISA。对其特异性、敏感性和重复性进行试验，并与其他常规方法进行比较试验。结果表明：该方法的特异性强、敏感性高和重复性好，明显优于其他常规方法。     

猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其部分毒力基因序列遗传变异分析

为了解吉林省猪伪狂犬病毒（PRV）的遗传变异情况,本研究将采集自吉林省疑似发生猪伪狂犬病的临床样品,通过细胞传代、PCR检测和测序分析进行病毒分离鉴定。TCID₅₀法测定分离毒株的病毒滴度,通过家兔感染试验测定分离毒株对家兔的致病性。对TK、gB、gC、gD和gE基因进行PCR扩增和测序,分析其遗传变异情况。结果表明,临床样品经PK15细胞传代后,有3份样品出现细胞病变,经PCR鉴定和测序分析表明,分离获得3株PRV,分别命名为PRV JL03、JL12和JL15株。通过PK15细胞测定分离毒株的病毒滴度分别为10^6.5、10^6.5和10^7.5TCID₅₀/mL。6只家兔分别接种3株分离毒株（10^3.5TCID₅₀/只）后均表现为体温升高、注射部位奇痒和四肢麻痹等症状,且于病毒接种后3~4 d全部死亡。3株分离病毒TK、gB、gC、gD和gE基因推导氨基酸序列分析结果表明,与参考毒株相比,分离株TK基因未发生氨基酸变异;gB、gC、gD和gE基因部分位点发生氨基酸缺失、插入或突变,其中gE基因在第48和496位分别存在1个天冬氨酸的插入,与国内报道的流行毒株变异特征一致。遗传进化树分析结果表明,3株分离毒株TK、gB、gC、gD和gE基因与国内2012年以后分离的参考毒株JS-2012和ZJ01等的上述基因均表现出较高的同源性,说明毒株间亲缘关系较近,位于同一分支;与国外分离毒株NIA3和Becker等亲缘关系较远,位于不同的分支;而与国内早期流行的毒株SC和Ea等亲缘关系介于二者之间。本研究成功分离鉴定了3株PRV变异株,分离毒株对家兔具有较强的致病性,该结果为吉林省PRV流行病学研究提供了新的数据,并为相关后续研究奠定基础。     

金黄色葡萄球菌氟喹诺酮的耐药性与gyrA、gyrB突变的关系研究

为了探讨金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮耐药性与gyrA、gyrB突变的关系，本研究对氟喹诺酮敏感金黄色葡萄球菌进行耐药诱导，获得一系列不同氟喹诺酮耐药水平的人工诱导耐药菌，应用PCR扩增野生菌和人工诱导菌的gyrA、gyrB基因并测序，经核苷酸和氨基酸序列分析表明：氟喹诺酮耐药菌的gyrB基因无突变，氟喹诺酮耐药菌的gyrA有Ser85→Leu和Ser84→Pro的突变。实验结果表明：gyrA突变是金黄色葡萄球菌氟喹诺酮耐药水平增高的主要原因。     

30种中草药对耐药性猪链球菌的抑菌试验

为了观察中草药对耐药性猪链球菌的体外抑菌效果,将所选中草药按常规法制备水提取物,用平板打孔法和试管两倍稀释法检测中草药水提取物对耐药性猪链球菌的抑菌作用.结果所选30种中草药中8种对上述病原菌有中度以上抑菌作用.其中以维吾尔草药V抑菌作用最强,其次是柴胡、吴茱萸、维吾尔草药U、诃子和石榴皮.结果表明所选部分中草药中对耐药性猪链球菌有较强的抑菌作用.     

动物源性金黄色葡萄球菌耐药性的检测

用K—B法对52株动物源性金黄色葡萄球菌进行了17种抗生素耐药性检测。结果，试验菌对16种抗生素的耐药率达19．2％～84．6％，耐药率最高的为氨苄青霉素，最低的为头孢曲松；其中对12种抗生素的耐药率在50．0％以上；在52株金黄色葡萄球菌中最少的耐2种抗生素，最多的耐15种抗生素，表明临床分离的金黄色葡萄球菌株均表现高水平耐药和多重耐药；受试菌均对万古霉素敏感。     

鹿结核分枝杆菌流行株Rv3874-Rv3875融合基因的克隆及原核表达

以吉林农业大学经济动物疾病实验室分离并保存的鹿结核分枝杆菌流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术(Splicing by overlap extension,SOE)设计引物,克隆Rv3874-Rv3875融合基因,构建重组表达质粒p GEX-4T-1-Rv3874-75,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明:测序后融合基因Rv3874-Rv3875的序列与Gen Bank中序列的符合率为100%,重组表达质粒p GEX-4T-1-Rv3874-75在大肠杆菌中成功诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白,经SDS-PAGE分析该蛋白的相对分子质量约49 ku,经Western blot鉴定纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性。     

金黄色葡萄球菌氟喹诺酮的耐药性与grlA、grlB突变的关系

为了探讨金黄色葡萄球菌的氟喹诺酮耐药性与grlA、grlB基因突变的关系,从52株野生型金黄色葡萄球菌中筛选出1株对氟喹诺酮敏感的金黄色葡萄球菌,对其进行耐药诱导,获得一系列不同氟喹诺酮耐药水平的金黄色葡萄球菌,并对其grlA、grlB基因进行PCR扩增、测序及序列分析。结果表明,金黄色葡萄球菌的氟喹诺酮耐药性与grlB基因突变无关,而与grlA的丝氨酸(Ser)80→苯丙氨酸(Phe)和谷氨酸(Glu)84→赖氨酸(Lys)突变密切相关。金黄色葡萄球菌grlA的80位氨基酸和84位氨基酸双突变是其氟喹诺酮耐药性提高的标志之一。     

鹿布鲁氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

本研究依据布鲁氏菌的特异性基因Omp25c的部分片段作为靶基因,设计探针引物,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到PGEM-T载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线可知该方法的最低检测浓度可达到36拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。