实时荧光RT-PCR鉴别小反刍兽疫病毒疫苗株和野毒株

为快速鉴别小反刍兽疫病毒的疫苗株和野毒株,本研究通过分析Gen Bank中已发布的小反刍兽疫病毒全基因组序列,设计了1对通用引物以及疫苗株和野毒株特异性探针各1条,建立了小反刍兽疫病毒鉴别实时荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对疫苗株和野毒株的检测灵敏度均可以检测至10拷贝/反应,在108至101拷贝/反应之间具有良好的线性关系,扩增效率均接近1。该方法具有良好的特异性,能够区分不同谱系的野毒株株和疫苗株。使用该方法对136份临床疑似样品检测,检出的阳性数量与普通RT-PCR相同,并且测序后的区分结果也相同。本方法的建立为该病的实验室鉴别检测和流行病学调查提供了技术支持。     

尼帕病的流行与防控技术研究现状

尼帕病首次暴发于东南亚地区的马来西亚,不但严重危害养猪业,而且严重影响着人类的健康。目前,孟加拉国、印度每年都有尼帕病暴发的报道。通过病毒N基因序列的系统进化分析发现,尼帕病毒进化分为两个发展方向。目前还没有研制出有效的抗尼帕病毒药物、疫苗。我国已经初步建立了实时定量RT-PCR和间接ELISA检测尼帕病毒的方法,虽然还没有发现该病的报道,但存在传入的风险。提议我国应将尼帕病纳入综合防控管理范围,积极开展尼帕病防控的宣传与培训,加强尼帕病的技术研究和监测,并制订相关的应急预案。     

陕西省饲料加工机械产品质量状况分析

<正>饲料加工机械用于将各种饲料原料加工成不同类型、不同规格的饲料,在我国使用十分广泛,是我国饲料加工业的主要装备。近年来畜牧乳品行业呈稳步上升态势,我国目前存在着集约化养殖和散户养殖两种形式,饲料加工机械大中小型企业并存。饲料加工机械主要分为饲料粉碎机、秸秆揉丝机、铡草机和青饲料切碎机等。陕西省的饲料加工机械主要分布在西安、汉中、宝鸡等地,随着陕西省农村养殖业的发展,对     

伪狂犬病及其根除:美国经历的回顾——从技术协调员视角学到的教训

正在本文,技术协调员将他认为对伪狂犬病毒(PRV)根除项目的成功产生重大帮助的事项进行了记录,并且强调了对PRV保持警惕和准备好在监测系统发现PRV时及时响应的重要性。本文还对从PRV根除项目获得的重点信息和经验教训等信息进行了最后的总结。一、猪肉生产商猪肉生产商的参与是根除活动的一个重要方面。绝大多数猪肉生产商的猪群未感染PRV,也不希望他们的猪感染PRV。因此,他们会积极投身     

规模化奶牛场结核病的净化与防控

牛结核病是由结核分支杆菌引起的一种人畜共患慢性传染病.近年来,牛结核的发病率逐年上升,严重影响畜牧业的持续发展,威胁着人类的健康,如果不能有效地控制和消灭,不仅会造成严重的经济损失,更会导致严重的社会公共卫生问题.结核病的易感动物中牛最易感,奶牛尤为易感.奶牛场集中饲养,如有个别牛发病没有及时隔离,便会很快蔓延全群,且由于人类生活与牛奶、牛肉制品关系非常密切,人接触病牛、饮用病牛的生乳或制品均可被感染,所以奶牛场结核病的防控和净化极为重要.本文根据《牛结核病防治技术规范》、《2009-2015年布鲁氏菌病结核病防治规划大纲》和实践经验,对结核病的诊断、净化、防控等方面进行了归纳与总结,希望能对奶牛场结核病的防控和净化有所帮助.     

表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定

本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组,得到pAd-ASFV-P72重组质粒;重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,连续传代后获得重组腺病毒。结果表明,获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×10~9 IFU·mL~(-1);经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达,且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72,不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础,还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。     

规模化奶牛场布鲁氏杆菌病的诊断、净化、防控

布鲁氏杆菌病是由布鲁氏杆菌引起的重要的人兽共患慢性传染病。凡是养牛的地区均有不同程度的流行和感染,每年因此造成巨大的经济损失,严重影响畜牧业的持续发展,威胁着人类的健康。由于奶牛场集中饲养,如有个别发病没有及时隔离,便会很快蔓延全群,如果不能有效地控制和消灭,不仅会造成严重的经济损失,更会导致严重的社会公共卫生问题。人类生活与牛奶、牛肉制品关系非常密切,人接触病牛、饮用病牛的生乳或制品均可被感染,所以奶牛场布鲁氏杆菌病的净化、防控极其迫切、尤为重要。笔者根据《布鲁氏杆菌病防治技术规范》、《2009—2015年布鲁氏杆菌病结核病防治规划大纲》和实践经验,对布鲁氏杆菌病的诊断、净化、防控几方面进行归纳、总结,希望能对奶牛场布鲁氏杆菌病的净化、防控有所帮助。     

单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立

在制备针对猪附红细胞体病的特异性单克隆抗体的基础上,建立了单抗捕捉快速检测猪附红细胞体病抗体的ELISA方法,并对影响ELISA结果的各项反应条件进行了优化.结果表明,猪附红细胞体腹水单抗的最佳稀释度为1:20 000,猪附红细胞体病抗原工作质量浓度为4.088 mg/L,血清稀释度为1:40,HRP标记的兔抗猪IgG的工作浓度为1:5 000.待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1 h;底物在室温显色时间为10 min.已建立的ELISA方法与PCR平行检测50份样本,总符合率为92%,表明该方法特异性强、快速、敏感性高.用该法检测了各地采集的171份血清,阳性率为40.4%,与镜检的符合率为59.2%;阴性率为47.4%,与镜检的符合率为66.7%,总符合率为67.3%.     

PPR与RP病毒N蛋白片段的克隆表达与纯化

目的选取PPRV和RPVN蛋白中抗原性较强、氨基酸差异性较大的片段进行重组表达。方法对PPRV和RPVN蛋白中51-175aa、376-525aa蛋白片段基因进行大肠杆菌偏爱密码子优化后人工合成,利用分子生物学技术,将目的基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒,将重组表达质粒转化至E.coliBL21(DE3),诱导表达并纯化PPRV与RPVN蛋白中51-175aa、376-525aa片段。结果得到了分子量分别约17.8kD、20.6kD的各两段融合蛋白。结论本研究成功表达了PPRV和RPVN蛋白中抗原性较强、氨基酸差异性较大的51-175aa和376-525aa蛋白片段,为制备能区别PPR和RP病毒的特异性单抗提供了抗原。