用重组核衣壳蛋白ELISA检测PRRSV抗体的研究

ＰＲＲＳＶ重组Ｎ蛋白ＥＬＩＳＡ检测人工感染猪血清７５份,与ＩＤＥＸＸ公司ＥＬＩＳＡ试剂盒及ＩＦＡ的符合率分别为９７．３％和１００％。检测疫苗免疫猪血清,阳性率１００％。在免疫后６ｄ就能检出抗体,比ＩＦＡ敏感。检测８５份我国田间猪血清,阳性率１８．８％。     

非洲猪瘟自然弱毒株演变进程

自2018年非洲猪瘟(African swine fever,ASF)传入中国以来疫情得到了有效控制.但2021年以后,我国的ASF流行情况出现了新的变化,临床中出现了"自然变异株".这些毒株可能导致感染后临床症状不典型,容易与其他疫病混淆等问题.这与国外的流行演变规律一致,即当ASF在一个国家或地区流行较长时间后,其...     

我国动物疫病防控工作中存在的问题及建议

本文从强制免疫、检疫监管、动物疫病监测、防控的科学化和防控保障五个大方面提出目前动物疫病防控中存在的问题,并针对这些问题提出了相关建议。     

马动脉炎病毒N蛋白基因GST融合表达载体的构建及表达

采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因0RF7,并将其克隆到pMDl8-T载体,构建成重组质粒pMDl8-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAVNC-002532株的同源性为99％。表明0RF7是EAV基因组内的保守序列,将0RF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21（DE3）,诱导表达后SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶（GST）下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

饲料中动物源性成分的检测技术研究进展

痒病和牛海绵状脑病（疯牛病）都属于传染性海绵状脑病，其病原是蛋白质侵染颗粒——朊毒体（Prion）。痒病是羊的一种比较古老的疾病，而疯牛病是最早在英国出现的一种新病，1987年Weels等正式报道，然后迅速传播到欧洲多个国家和地区，给英国和欧洲的养牛业造成了巨大损失，并影响到相关产业。     

禽流感防控和免疫策略分析

1概述禽流感是一个世界性难题,近年来由于它给全球养禽业乃至人类生命安全所造成的重大威胁和危害,世界动物卫生组织(OIE)将其列为对人类和动物健康具有重大威胁的疾病,引起越来越多的关注和重视。H5N1亚型高致病性禽流感自2003年在东南亚开始暴发以来,     

猪链球菌2型38 000蛋白主要功能区基因的克隆与表达

根据GenBank中已发表的猪链球菌2型38000蛋白基因核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,采用PCR方法,以四川分离株猪链球菌2型基因组DNA为模板扩增38000蛋白主要功能区基因。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接转化宿主菌DH5α,提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。将目的片段定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、0.8mmol/LIPTG条件下进行诱导表达,结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量约为35000的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western blotting)证实该重组蛋白可以与猪链球菌2型阳性血清发生特异性反应。     

心水病病原体高度保守基因合成与原核表达

通过软件DNAStar分析,设计合成心水病病原体抗原性、保守性比较高的一段基因,长度为564bp,将它插入pUC57载体,再转入pET-32a质粒中进行原核表达并纯化表达产物。结果表明,合成的基因在大肠杆菌中得到高效表达并能简易地提纯,纯化的表达产物有望用于心水病免疫学检测;此合成外来基因还可以作为心水病病原PCR检测的阳性对照。这些工作为我国建立心水病防控技术储备奠定了一些基础,也为防控高度危险性外来传染病提供一种安全和可行的研究新思路。     

一株水貂犬瘟热病毒的分离与鉴定

为寻找免疫失败的原因,有效防治犬瘟热的流行,对临床一水貂犬瘟热疑似病例,取其肝、脾、脑等组织研磨后接种Vero和BHK细胞分离病毒,并对分离毒株进行一系列鉴定。通过电镜观察,发现了大小约150 nm的副黏病毒样粒子。结果表明,分离株对鹅、鸡、小鼠、家兔、山羊、猪红细胞均无凝集性,该分离株的毒价TCID50为10-4.87;分离株病毒对乙醚、氯仿敏感,病毒的核酸型为RNA。经间接免疫荧光试验,接种病毒的BHK细胞出现特异性的亮绿色荧光。对分离株和对照毒株分别提取RNA进行RT-PCR扩增,最后得到与预期扩增片段(294 bp)相符的核酸电泳带,充分证明分离病毒为犬瘟热病毒。     

塞尼卡谷病毒重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条检测方法的建立

为建立塞尼卡谷病毒(SVV)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对SVV 3D基因设计了引物和探针,通过反应条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验,建立了SVV RPA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,该方法与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、圆环病毒、伪狂犬病毒无交叉反应;在40℃、20 min内可检测的最低浓度为56拷贝/μL质粒标准品;通过3次重复试验检测,LFD检测线灰度值变异系数范围在4.49%~9.73%。利用该方法对120份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究首次建立了检测SVV的等温、快速RPA-LFD方法,读取结果不依赖任何仪器设备,为猪群感染SVV的现场快速诊断、流行病学研究和根除方案的制定提供帮助。