小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定

本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础.首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L.通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况,并从mRNA水平上验证蛋白表达的正确性;扩增PPRV基因组两末端序列和eGFP报告基因,三者通过overlap-PCR连接并克隆至转录载体pOL-TV5中构建微型基因组.将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染.经鉴定各辅助质粒完全正确,构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染,报告基因均表达.本试验成功构建了PPRV分离株的表达N、P和L蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组,并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为PPRV反向遗传操作的辅助质粒,为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础.     

I类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。     

非洲猪瘟研究进展

非洲猪瘟(ASF)是由病毒(ASFV)引起的家猪和野猪的一种高度接触性传染病,所有品种和年龄的猪均易感。家猪感染后出现发热、高病毒血症和出血性病变等典型特征,发病率高,但死亡率因感染毒株和猪品种的不同而有所差异,从5%到100%不等。通常将临床表现分为最急性、急性、亚急性和慢性四种类型,最急性和急性型病死率高,解剖病变与古典猪瘟     

携带小反刍兽疫病毒H基因的重组山羊痘病毒构建和鉴定

将小反刍兽疫病(PPRV)毒糖蛋白基因H插入到山羊痘病(GPV)毒通用转移载体PtkPgpt-egfpP启动子P7.5的下游,构建了重组山羊痘病毒转移载体PtkPgpt-egfpPpprv-H。该重组转移载体转染感染山羊痘病毒疫苗株的绵羊睾丸细胞中,通过同源重组获得小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒,通过纯化和PCR鉴定,证明小反刍兽疫病毒H基因插入到山羊痘病毒基因组中。本研究为进一步研究PPRVH基因重组山羊痘病毒的免疫原性奠定了基础。     

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽提，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲＩ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因筛选出３个复制非必需片     

牛巴贝斯虫核酸探针检测中血样处理优化试验

分别采用光敏生物素，地高辛标记的牛巴贝斯虫ＤＮＡ探针检测三种血样处理方法提取的虫体ＤＮＡ，结果表明：ＴｒｉｔｏｎＸＺ－１００／乙酸处理方法与全血提取法有相同检测水平；但前者操作简便；皂素处理法不能回收全部虫体，降低了探针敏感性。     

地高辛标记探针检测重组鸡痘病毒中的MDVgB基因

以XbaI从pVLgB中切下gB基因片段，用dig试剂盒通过六聚核苷酸随机引物合成DNA探针，对粗提的重组FPV、MDVGA、FPV282E4和CEFDNA以及pFGB1175质粒DNA进行打点杂交（Dot－blot）。经免疫学测定、NBT显色后发现，重组FPV、MDVGA、pFGB1175斑点呈明显阳性反应；而FPV282E4和CEFDNA则呈阴性反应．从而在DNA水平上证实了重组FPV基因组中gB基因的存在。     

禽痘病毒的分子生物学——Ⅱ禽痘病毒载体（续）

历史上，痘菌病毒（VacciniaVirus）的应用曾帮助人类消灭了灾难性的疾病一天花，时至八十年代初，当Moss和Paoletti的实验室各自独立地证实痘苗病毒基因组的标记拯救现象时，这一准备冬眠的病毒又呈现了新的活力，它被广泛用作外源基因的表达载体。十多年来，50余种原核、真核基因在其中获得表达，而且所构建的活载体疫苗一般都具有良好的免疫原性。然而，由于痘苗病毒在使用过程中能引起严重的副反应，以此为基础的重组疫苗并未能获准在实际中反应。八十年代后期，在兽医领域内开始开发宿主持异性的症病毒载体，禽痘病毒载体即应运而生…     

小麦应用高脂膜防病抗干热风增产的效果研究

小麦应用高脂膜防病抗干热风增产的效果研究@杜建$西北农林科技大学!杨陵712100 @邢宏宜$西北农林科技大学!杨陵712100 @贾涛$西北农林科技大学!杨陵712100 @赵俊兴$西北农林科技大学!杨陵712100 @韩淑英$陕西省计委!西安710001     

沸石粉能提高家禽饲料利用率

沸石粉是一种天然铝硅酸盐矿物质，由专业工厂将其加工成饲用添加剂，家禽采食后，这种添加剂可吸附其体内的硫化氢等有害物质，减轻肝、肾、肺的生理负担，催化消化酶的分泌和维持消化道酸碱平衡，还可提供一些有益的矿物元素。