NTE基因ShRNA慢病毒载体的构建与鉴定

【目的】构建神经病靶酯酶(NTE)蛋白低表达的ShRNA重组慢病毒表达系统。【方法】依照ShRNA序列设计原则设计带酶切位点的NTE ShRNA序列,与表达载体pLL3.7连接构建NTE ShRNA重组表达质粒,转染DH5α菌观察重组表达状况,与pCVM-VSV-G包膜质粒和pCMV-dr8.2dvpr表达质粒共转染293T细胞,包装得到重组慢病毒。用病毒稀释法以绿色荧光蛋白(GFP)为标记,确定转染效率及病毒含量。【结果】经酶切及测序鉴定结果显示成功构建pLL3.7-NTE ShRNA慢病毒载体。重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染293T细胞后获得高表达的细胞,共转染48h后,收集病毒液检测病毒滴度达4.5×10~4/mL。【结论】成功构建NTE ShRNA慢病毒重组表达系统。     

橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移的影响

探讨橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移作用的影响。采用MTT、Griess、细胞划痕愈合试验分别检测细胞活力、细胞分泌NO、细胞迁移率。结果3种毒素对HepG2细胞增殖的影响随毒素浓度的增加呈现先促进后抑制的作用,低浓度DON、OTA(0.04μmol/L和0.08μmol/L),ZEN(<2μmol/L)显著提高HepG2细胞活力及促进增殖,高浓度霉菌毒素明显降低HepG2细胞活力及抑制细胞增殖。与霉菌毒素组比较,橙皮苷组HepG2细胞活力降低及增殖减弱,表示橙皮苷能缓解霉菌毒素对细胞的毒性。与空白对照组比较,霉菌毒素组HepG2分泌NO量显著降低,不同浓度及不同霉菌毒素对NO分泌没有明显影响;与霉菌毒素组比较,橙皮苷组不同浓度DON处理的细胞分泌NO差异不显著。低浓度DON毒素(0.08μmol/L^2μmol/L)处理HepG2细胞24、36、48 h后,DON毒素能极显著促进HepG2细胞迁移,随着霉菌毒素对细胞处理时间延长细胞迁移快,而高浓度DON毒素(10μmol/L、50μmol/L)对促细胞迁移影响显著低于低浓度DON。结果低浓度DON霉菌毒素促进HepG2细胞增殖及迁移,表明DON毒素对HepG2具有潜在的致癌性,橙皮苷能抑制HepG2细胞增殖及缓解霉菌毒素毒性的作用。     

毒害艾美耳球虫早熟株对鸡免疫效果的评价

[目的]探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据.[方法]取4日龄健康、体质量50～70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡地面饲养,试验期81 d.对照组、免疫组(免疫组包括一免组和二免组)鸡饲喂基础日粮,盐酸氨丙啉添加组鸡按照药物说明全程基础日粮加盐酸氨丙啉拌服.一免组鸡4日龄一免,剂量1 000个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊;二免组鸡53日龄二免,剂量200个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊.鸡25日龄、53日龄、74日龄时从地面饲养的各组随机抽取6只鸡移到笼上饲养,同时设置红对照组(鸡不免疫不喂药仅攻毒).笼养鸡除对照组外,其他组鸡均攻毒,攻毒方法为逐只鸡经口接种毒害艾美耳球虫亲本株(10X104个孢子化卵囊/只).肉眼观察鸡临床症状,测定鸡平均相对体增质量、小肠病变记分、小肠病变记分减少率、存活率、卵囊减少率与抗球虫指数等指标.[结果]免疫鸡攻毒后,临床观察对照组鸡精神状态良好,未出现任何异常症状;免疫组与红对照组相比精神状态良好、血便减少.不同日龄鸡(25日龄、53日龄和74日龄)攻毒后第7天,盐酸氨丙啉添加组和免疫组鸡相对体增质量均明显低于对照组但极显著高于红对照组且二免组高于一免组.免疫组鸡小肠平均病变记分均低于红对照组,小肠病变记分减少率高于红对照组,其中二免组不同日龄攻毒后鸡小肠平均病变记分均低于一免组,且74日龄鸡攻毒后小肠病变记分减少率最高.红对照组不同日龄鸡卵囊数极显著高于盐酸氨丙啉添加组和免疫组,其中免疫组53日龄鸡和74日龄鸡攻毒后卵囊数均显著高于盐酸氨丙啉添加组,卵囊减少率低于盐酸氨丙啉添加组,且二免组74日 龄鸡攻毒后卵囊减少率高达90％.免疫组不同日龄鸡抗球虫指数极显著高于红对照组,二免组不同日龄鸡抗球虫指数均高于145且高于一免组,即二免组鸡抗球虫效果达到中效水平.[结论]毒害艾美耳球虫早熟株2次免疫对鸡具有良好的保护效果,且对鸡生长发育的影响较小.     

地方高校人力资源管理理论的实践应用

人力资源是地方高校的核心竞争力,因此人力资源管理理论在地方高校的实践尤为重要。学者唐建宁结合自己多年从事高校人事管理的工作经验,对高校人力资源管理进行了深入研究,并著有《高校人力资源的有效性管理探究》一书,以期对高校的人力资源管理工作给出合理建议。该书由中国广播影视出版社于2019年7月出版,对从事地方高校人力资源管理工作的人员将起到指导日常工作的作用。     

规划引领助力乡村振兴的实践探索

为进一步提升规划研究和服务能力,基于浙江省农业科学院的规划实践,从产业、人才、文化、生态、组织五个层面分析规划引领助力乡村振兴的内在机理,提出强化规划引领助力乡村振兴的发展路径。     

胃扩张-扭转综合征

胃扭转实际是指胃扭转一扩张综合征(Gastric Dilatation-Volvulus，GDV)，这是一种条件性疾病，常发于胸腔较深的大型品种犬，尤其是中老年犬。在小型犬和猫也有发生GDV的报道。推测诱发该病的因素包括超重、过食、采食速度过快、食后剧烈运动以及性情狂躁等。该病在临床上常呈现以下3种状况：第一种是GDV，即扩张与扭转同时发生；     

北京犬椎间盘软骨终板的组织学观察

每个椎间盘的头尾界由覆盖于相邻两椎骨体骨骺上的软骨终板构成.1999年[1]和2000年[2],彭宝淦等以新西兰兔为实验动物,采用人工造模的方法,从组织学的角度对软骨终板的形态进行了观察,并对终板软骨的各层厚度进行了测定,指出软骨终板钙化可能是椎间盘退变的启动和促进因素.     

北京犬椎骨骺板闭合时间观察及椎间盘指数的测定

为了探讨椎间盘结构变化与椎间盘疾病的关系,人医从椎间盘的各个方面均进行了较为详细的研究。相比较而言,兽医对椎间盘的研究则欠缺很多,其中就包括对北京犬脊柱随年龄增长变化的观察。基于这一点,作者在进行北京犬椎间盘组织学观察的同时,又通过影像学方法对北京犬椎体骨骺从1月龄到11月龄的连续变化进行了观察,测得了北京犬T11到L7椎体骺板闭合的时间,并据此对骺板闭合前、后及病理组的北京犬椎间盘指数进行了比较,其方法和结果如下。1材料与方法1.1实验动物北京犬42只。年龄分布为1~9月龄25只,10月龄以上13只,临床病例4只。其中健康犬…     

猪伪狂犬病的防制措施

<正>猪伪狂犬病是由疱疹病毒群的伪狂犬病毒(ADV)所引起的一种病毒性传染病。猪的感染因年龄不同症状有所区别,小猪以中枢神经症状为特征,呈非化脓性脑炎;断奶猪及育肥猪以呼吸系统症状为主;怀孕母猪表现流产、死胎、木乃伊胎。2周龄以内小猪致死率可达100%。     

表达M2e-EYFP融合蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫生物学特性分析

本文从卵囊形态大小、潜在期、最短孢子化时间、致病性与免疫原性等生物学特性方面对表达M2e-EYFP融合蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫及其受体野生型柔嫩艾美耳球虫进行了比较分析.结果显示,转基因球虫的上述生物学特性与柔嫩艾美耳球虫种相符,且与其受体野生型球虫具有较高相似性,但也存在部分差异,主要表现在卵囊大小、最小潜在期、繁殖力、致死率和免疫后抑制卵囊产量上.分析原因,作者认为是单孢子囊筛选所致.