噬菌体与动物细胞的相互作用

噬菌体是动物体内最丰富的生物群体。噬菌体易获得、宿主特异性强、不易产生耐药性等特点使其在治疗耐药细菌感染方面具有很大优势。随着基因工程和显微镜技术的发展,噬菌体对动物细胞的调节机制逐渐被发现。笔者综述了近年来关于噬菌体进入动物细胞的机制、噬菌体在细胞内的分布及与细胞内受体相互作用的研究进展,强调了噬菌体在协助宿主细胞杀灭细菌过程中的作用,讨论了噬菌体与动物细胞相互作用对噬菌体治疗的意义,旨在为噬菌体治疗耐药细菌的研究提供理论基础。     

两株H6亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传进化分析

为研究2016年在活禽交易市场鸭体内分离的2株H6亚型禽流感病毒(AIV)[分别是A/duck/Jiangxi/88/2016(H6N6)(简称DK/88/16)和A/duck/Jiangxi/219/2016(H6N2)(简称DK/219/16)]分子特征及遗传进化规律,本实验对其进行了全基因组扩增和测序,并进行了遗传进化分析。结果显示,2株病毒间HA基因同源性较低,仅为94.5%,但与我国近年分离的H6亚型病毒株保持较高同源性。DK/88/16和DK/219/16的NA基因分别与我国近年流行的流感病毒N6和N2基因保持较高同源性。对2株病毒的内部基因分析显示,其内部基因的来源较为复杂,其中DK/88/16的内部基因PA来源于我国最近流行的H5N2或H5N6病毒,显示该株病毒为新的重组病毒。对2株病毒的分子特征分析显示,除M1蛋白的30和215位点及NS1蛋白的42位点具有增强病毒对小鼠致病力的分子特征外,其余均保持低致病力分子特征。以上结果表明,H6N2和H6N6亚型AIV在我国鸭群中持续存在,并不断的遗传重组,需要进行持续的流行病学监测。     

致病性大肠杆菌携带原噬菌体的预测及耐药性与毒力研究

【目的】研究致病性大肠杆菌携带原噬菌体的比例、原噬菌体携带毒力基因及耐药基因的情况,了解致病性大肠杆菌中原噬菌体对菌株的耐药性与毒力的影响,保证噬菌体生产菌的生物安全性,为大肠杆菌噬菌体的基础研究与应用提供借鉴。【方法】从NCBI中下载大肠杆菌全基因组信息,通过在线网站预测大肠杆菌中携带的原噬菌体数目,并分析原噬菌体的GC含量、基因组大小、占细菌基因组比例等基因组特征及完整型原噬菌体的类型,对原噬菌体做初步分类,统计分析完整型原噬菌体中携带耐药基因数目、耐药表型、耐药机制与毒力基因数目、毒力基因家族分布等。【结果】112株大肠杆菌携带完整型原噬菌体1 024个,疑似型原噬菌体287个,缺陷型原噬菌体505个。1 024个完整型原噬菌体中,多数与长尾噬菌体相似,占70.21%(719/1 024);共有63种噬菌体类型,其中BP4795(登录号：NC＿004813.1)类型的占比最高,达到19.24%(197/1 024),其次是DE3(登录号：NC＿042057.1),占比11.72%(120/1 024)。大肠杆菌携带原噬菌体的GC含量在38%～57%之间,基因组大小为3.1～152...     

PRRSV在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤,试验将3头60日龄的健康仔猪随机分为2组,A组2头,B组1头.A组滴鼻接种PRRSV LC毒株(TCID50为1×10-5.25/0.1 mL)3 mL/头,B组为对照组,观察临床症状.攻毒25 d后剖杀,采集淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏各2份,其中一份进行中性福尔马林固定,制作石蜡切片,观察组织病理学变化;另一份在-70℃保存,利用RT-PcR检测PRRSV.病理学检查结果表明:肺脏出现明显的间质性肺炎,肺泡渗出物增多,可见局灶性出血;脾脏和淋巴结可见出血、增生;肝脏中央静脉及门管区静脉可见明显的淤血.利用RT-PCR方法在淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏中都检测到了PRRSV.     

兽医微生物学基础验证性和综合设计性实验两段式实验教学模式的构建

2014—2018年,聊城大学动物医学专业将兽医微生物学实验教学分为2个阶段,第1阶段主要开设基础验证性实验,培养学生的基本操作技能;第2阶段开设综合设计性实验,培养学生的科研意识和团队协作精神。经过几年的探索与改进,逐步构建了较为成熟的两段式实验教学模式。采用该教学模式,有利于高素质人才培养,并可为畜牧兽医行业输送高素质应用型和科研型人才。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

根据文献合成1对针对PRRSV毒株ORF6基因高度保守序列的引物,建立用于检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR诊断方法.提取PRRSV-LC病毒RNA,经所建立的荧光定量RT-PCR方法扩增,可获得特异的扩增曲线,而日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒(PCV)进行同条件检测,结果为阴性;方法可检测到1 TCID_(50) PRRSV,比琼脂糖凝胶电泳敏感度高10～100倍.结果表明,所建立的PRRSV荧光定量RT-PCR诊断方法特异性好、敏感性高,可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断和科学研究.     

2017-2019年山东省部分地区猪瘟流行病学调查

为掌握近年来山东地区猪瘟病毒（CSFV）的流行及其遗传变异情况,本研究对2017年1月-2019年12月从山东省济南市、泰安市、聊城市、青岛市等10个地区采集的1 687份疑似猪瘟感染猪病料运用反转录PCR方法进行了病毒核酸检测,将CSFV检测为阳性的样品进行E2基因和CSFV全基因扩增和测序,利用生物信息学软件DNAStar和Mega 7.0对CSFV的E2蛋白以及全基因序列进行遗传进化分析。另外,将这些地区采集的4 866份血清样本进行了抗体ELISA检测。结果显示,1 687份病料中病原检测有188份阳性,总阳性率为11.1%,其中2017-2019年病原检测阳性率分别为8.5%、13.1%、15.1%,抗原阳性率逐年上升且呈不稳定性,提示规模化猪场猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫存在一定的风险和压力;采集的4 866份血清样本中4 146份呈现抗体阳性（85.2%）,统计得到2017-2019年抗体阳性率分别为84.3%、83.0%、92.3%,抗体阳性率呈现上升趋势,说明山东省规模化养殖场猪群猪瘟疫苗免疫保护的整体水平逐年提高;从阳性病料中扩增获得了5株CSFV全基因组序列和5株病毒E2基因序列,经过序列比对发现,5株临床分离毒株与2.1d亚型的CSFV全基因组序列同源性在97.5%~99.0%之间,表明5株分离毒株与2.1d亚型的CSFV亲缘性较近,分离毒株氨基酸位点的突变集中在102位（L→M）以及159位（K→R）氨基酸处。本研究分析了2017年1月-2019年12月山东部分地区猪群中CSFV毒株的流行与变异情况,为指导山东省CSFV预防与控制提供了有力的参考。     

肉鸡组织脏器的急性热应激损伤及HSP90的表达

将30日龄AA肉鸡在(40±1)℃高温中分别持续2、3、5和10 h,定期剖杀,进行临床血液病理学、组织病理学和免疫组织化学检测.结果表明在热应激2～5 h 内,受试鸡外周血液中肌酸激酶活性持续升高(P<0.01);当热应激持续到10 h时其活性出现降低,但仍明显高于对照组(P<0.01).受试鸡的组织脏器在应激前期损伤较严重,热应激2～5 h内,各主要脏器组织如心肌纤维、肝细胞、肾小管上皮细胞出现颗粒变性和脂肪变性,甚至坏死;而后期组织细胞的损伤则无明显坏死.提示在热应激持续一定时间后,机体可通过自身调节逐渐获得对高热的耐受能力.免疫组化结果显示,HSP90广泛分布在热应激受试鸡脏器组织细胞的胞浆和胞核中,尤其在组织的小动脉、毛细血管内皮细胞内呈现强表达.提示血管壁中HSP90可能通过血管的舒缩而影响组织器官的血液供应.     

鸡马立克病肝组织肿瘤病变与热休克蛋白转录、表达的相关性研究

研究马立克病毒引发肿瘤的发生、发展过程中,热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)转录表达水平、组织细胞内定位与肝病理组织学损伤之间的相关性,为进一步阐述HSPs的生物学作用奠定基础。通过人工感染建立鸡MD肿瘤模型,定期剖杀试验鸡,采集肝组织,利用组织学、免疫组织化学、荧光定量RT-PCR及ELISA方法,检测肝病理组织学损伤、HSPs组织细胞内定位以及HSPs转录、表达水平的动态变化。结果:在MDV感染14d后,感染组鸡肝组织可见大小不等的淋巴样瘤细胞浸润和局灶性生长;HSP90、HSP60在淋巴瘤细胞的细胞质内强表达,而HSP27、HSP70主要分布于肿瘤细胞外的肝细胞的细胞质内;感染组HSP70和HSP90mRNA转录水平始终极显著高于空白对照组和疫苗免疫对照组;感染组HSP90的表达量始终极显著高于空白对照组,HSP70表达量在14和21日龄时,极显著高于空白对照组,在28和35日龄时显著高于空白对照组,42日龄后与空白对照组和疫苗免疫对照组相比差异不显著。在MDV引发鸡肿瘤发生、发展过程中,HSP60、HSP90与HSP70、HSP27之间在肝组织细胞内定位截然不同,且HSP70与HSP90在肝组织内表达量变化趋势差异明显,说明不同HSPs在MD肿瘤发生、发展过程中的生物学作用存在差异。