提高大白菜小孢子胚胎发生及植株获得率的几个因素研究

春季生长在露地条件下的大白菜供体植株,在适宜开花期采集花蕾进行小孢子培养可显提高小孢子胚胎发生率。连续除即将开花花蕾,也可提高适宜花蕾内小孢子胚胎发生率。ＮＬＮ培养基添加０．０５～０．１ｍｇ·ｍＬ＾－１活性炭可使小孢子胚胎发生率提高１位以上,并使子叶型胚率提高２７．５％～６９．０％。小孢子培养２周后进行摇部养１周,可促进原胚迅速发育成子叶型胚,并提高胚发育同步性。培养３周的小孢子子叶型胚再生植     

中华锯齿米虾卵黄蛋白原部分cDNA序列的克隆

卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是广泛地存在于卵生脊椎和无脊椎动物体内的雌性特异性蛋白,是卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体,本文通过同源克隆的方法从成熟中华锯齿米虾的卵巢中克隆到了一条长474 bp的Vg cDNA序列。用DNAMAN中的Blast功能将此片段与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)、高背长额虾(Pandalus hypsinotus)的Vg部分序列进行比对,结果发现中华锯齿米虾与罗氏沼虾和高背长额虾的同一性分别为64%与62%。此片段为中华锯齿米虾Vg cDNA全长序列的克隆及其表达奠定了基础。     

四倍体大白菜小孢子植株的获得与倍性鉴定

以同源四倍体大白菜为试材,进行了游离小孢子培养的胚胎诱导条件及植株再生研究,并对再生株的染色体数进行了鉴定。结果表明：单核靠边期小孢子是诱导胚胎发生的最佳时期;     

四倍体大白菜小孢子培养获得初级三体的细胞学观察

研究结果表明：（1）由于同源四倍体大白菜的花粉母细胞内Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型配对的同源染色体发生不规则分离,后期Ⅰ,Ⅱ部分染色体落后和向两极分配不均衡,致使后期Ⅱ形成染色体数目变化于15－24的各类细胞,以染色体数为20的细胞为主,其次是19和21的细胞。（2）具有21条染色体的小孢子（2x 1)再生植株能力与正常小孢子（2x)再生植株能力相近(3) 减数分裂的各种异常效率和三体株获得率品系间存在差异。     

黄芪鲨烯合酶基因的克隆和序列分析

参照豆科其他植物的鲨烯合酶基因序列设计了引物,通过逆转录PCR方法,从荚膜黄芪(Astragalus membranaceus (fish.) Bge)中克隆了鲨烯合酶基因cDNA序列(GenBank登录号HQ829974).通过BLAST发现黄芪鲨烯合酶推测的氨基酸序列与大豆鲨烯合酶( BAA22559.1)序列相似...     

(S)-β-没药烯合酶N端截短对其功能的影响

【目的】探究(S)-β-没药烯合酶N端截短对其功能的影响。【方法】在截短处设计引物,引物引入限制性内切酶酶切位点,PCR产物经双酶切,连接到相应载体,经大肠杆菌Rosetta菌株表达,亲和层析纯化蛋白后蛋白酶切去融合标签,高分辨质谱测定蛋白分子量。体外催化产物经GC-FID/MS分析产物变化,Malachite Green无机磷酸含量法测定表观Kcat。【结果】截短10、20、30、40个氨基酸融合蛋白表达及纯化成功,GCFID分析结果表明去标签的不同长度截短的酶催化主产物均为没药烯,显示活性没有丧失;随着N端截短氨基酸数目的增多,表观Kcat稍有变化。截短60个氨基酸的融合蛋白His-N60表达成功,但亲和层析失败,取表达的上清蛋白体外催化,结果显示无倍半萜合酶活性。【结论】N端截短40个氨基酸不影响其产物特异性和活性。此结果和其他报道不一致,显示不同的倍半萜合酶N端的作用可能不同。