低温胁迫下民猪骨骼肌的转录调控分析

为了揭示民猪优良种质特性的遗传机理,解析其低温适应机制。本试验将6头6月龄体重相近的雌性民猪随机分成2组,每组3头个体。对照组个体置于温度控制在（18±2）℃的猪舍内,试验组个体置于室外的半敞篷舍内饲养,环境温度从第1天的5℃/-5℃降到最后1天的-15℃/-24℃,共处理了58 d。两组个体均保证自由采食和饮水,试验结束后,屠宰全部个体,取背最长肌进行RNA-seq。筛选民猪骨骼肌受低温诱导的基因和lncRNA,并对它们进行功能注释以及两者间调控关系的分析。RNA测序分析显示,民猪在经历58 d的低温胁迫后,骨骼肌内86个基因发生了显著上调,16个基因发生了显著下调;112个lncRNAs发生了显著上调,74个lncRNAs发生了显著下调。在发生显著上调的基因中,有4个与神经系统相关的基因NTSR2、ARC、FOSL1和RCAN1发生了显著上调,7个与基质转运相关的基因SLC2A4、SLC2A5、SLC4A10、SLC19A2、SLC20A1、SLC28A1和SLC38A2,6个与炎症和免疫相关的基因AREG、CISH、OTUD1、TRIB1、GPA33和ITPKC均发生了显著上调。而与昼夜节律相关的ARNTL基因和抑制细胞增殖的RASL11A基因等发生了显著下调。低温胁迫下,差异表达基因显著富集到细胞凋亡、直肠癌和癌症的转录误调节通路,说明细胞的增殖和凋亡受到影响。显著变化的lncRNA主要以反式调控作用于靶基因,且与靶基因间的互作关系复杂,它们调控的靶基因富集到单纯疱疹病毒1感染通路、MAPK信号通路和范可尼贫血通路。此外,再无其他通路受到影响。低温胁迫影响了民猪的神经和免疫系统,使细胞内的物质转运发生了变化,细胞的生长、分化也受到了影响,但由于基因发生变化的倍数较小（1～2倍为主）,且受影响的通路较少（仅3条）,因此推测低温胁迫并未对民猪的骨骼肌造成严重损伤。     

免疫胶体金技术基本原理及其在疾病检测中的应用进展

近年来胶体金标记技术迅速发展,应用范围也逐渐扩大,不仅应用于光镜和电镜水平定位、定性及定量研究含有抗原物质的组织、细胞及亚细胞结构,还应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金/银染色、免疫层析法(immunochromatography)和快速免疫金渗滤法(Dot immuogol     

东北野猪成纤维细胞HSP70基因表达对寒冷应激的响应

以东北野猪成纤维细胞为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术,分析4、15、25和32℃不同温度冷应激条件下细胞内HSPT0mRNA表达变化规律。结果显示在冷应激的低温处理过程中,HSP70mRNA转录量在各温度均为见显著增加;在冷应激的复温培养过程中,HSP70mRNA转录量在4℃和15℃处理后4h后,复温培养的4～8h显著增加（P〈O．05）;在25℃和32℃处理后4h后,复温培养未能诱导细胞内HSP70mRNA转录量显著增加（P〉0．05）;细胞在4℃和15℃处理2、4、6和8h后,复温培养4h,HSP70mRNA转录量随处理温度的减低和时间的延长而增加,处理4～8h组显著高于对照组（P〈0．05）,在25℃和32℃处理2、4、6和8h后,复温培养未能显著诱导HSP70mRNA的转录（P〉0．05）。结果表明,冷应激诱导东北野猪成纤维细胞内HSP70mRNA转录量的增加,不是发生在低温处理的应激阶段,而是发生在复温后的细胞应激阶段,温和冷应激（25～32℃）未能诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加,强度冷应激（4～15℃）诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加,且与冷应激的强度和时间成正比。     

重度冷应激下民猪背最长肌应答分子调控网络分析

为解析家猪在重度冷应激下骨骼肌应答反应的分子机制,本研究利用民猪的重度冷应激模型结合RNA-seq测序技术,对遭受重度冷应激后民猪背最长肌的基因和lncRNA的表达变化、功能注释以及两者间的调控关系进行了分析。结果表明：1）民猪在遭受3d的重度冷应激（-17℃～-26℃）后,背最长肌的53个基因发生了显著上调表达,35个基因发生了显著下调表达;53个lncRNA发生了显著上调,38个lncRNA发生了显著下调。差异表达基因中有多个与炎症反应相关的基因,如AREG、HAS1、MMP25和SLC11A1等基因发生了显著上调表达;与低温胁迫相关的TREH和与应激反应相关的TRIB3、与碳水化合物、葡萄糖和脂质代谢相关的HGFAC等基因也发生了显著上调表达。2）差异表达基因所参与的生物过程主要集中在胶原代谢、伤口愈合表皮细胞扩散和肌肉肥大调节过程等,且多位于细胞外区间;差异表达基因显著富集的生物学通路仅1个MAPK通路。3）存在显著表达差异的91个lncRNA顺式调控129个基因,反式调控750个基因,lncRNA与靶基因间的互作关系复杂。预测到的靶基因显著富集到MAPK和TNF 2个生物学通...     

影响青贮饲料品质因素的研究进展

针对我国反刍动物生产方兴禾艾的态势,青贮技术日益得到广大养殖户的认可,结合作者多年来学习及参与生产的实践经验,查阅近年来的相关研究成果,对影响青贮饲料品质的因素予以综述。     

民猪保种群体的遗传基础分析

为了科学准确地划分现有民猪保种群体的亲缘关系及家系结构,试验采用猪的"中芯一号"育种芯片检测了70头民猪的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP);使用MEGAX(V10.0)和R软件进行公畜样本及全部样本的聚类分析,使用Plink(V1.90)和R软件等进行近交系数的计算及因果突变分析,并统计分析影响猪的肉质性状、生长和体型性状、繁殖性状和抗病性性状等11个基因的基因型。结果表明:民猪保种群内的20头公猪可划分为5个血统,49头母猪可分别划入这5个血统,但有1头个体与这5个血统均不存在亲缘关系,而被归为"其他"。群体平均近交系数为0.11,属于中度近交。在因果突变分析中,该群体内氟烷基因和酸肉基因还未得到净化;采食量、抗仔猪腹泻和料肉比的优势等位基因占比较高,但影响多肋骨数和多胸椎数的优势等位基因占比非常低,还有较大的选择空间。说明未来该民猪保种群体要尽量避免近交,考虑引入新的公猪血统,尽快剔除携带有劣势基因型的个体,提升种群的生产性能。     

民猪肝脏对冷暴露的生理反应和代谢组学应答

[目的]本文旨在解析猪的肝脏组织对低温环境的反应机理。[方法]利用液相色谱质谱联用（LC-MS）技术研究了慢性冷暴露和急性冷暴露对民猪肝脏组织的代谢影响。试验选用6月龄体重相近的雌性民猪9头,随机分成3组,1组为对照组,1组为慢性冷暴露组（58 d）,1组为急性冷暴露组（3 d）。[结果]低温处理后,共鉴定出434个正离子和344个负离子代谢物,功能涵盖了5大类生物通路,主要聚集在新陈代谢和生物体系统2大生物过程。慢性冷暴露组共有59个差异显著的代谢物,其中32个显著上调,27个显著下调,急性冷暴露组共有17个差异显著的代谢物,其中9个显著上调,8个显著下调。组间仅有3个共同代谢物,分别为葡糖石胆酸、5-甲基尿苷和2-苯基丙酸。慢性冷暴露组的差异代谢物显著富集在37个代谢通路上,以β-丙氨酸代谢通路和铁死亡通路富集最显著,急性冷暴露组的差异代谢物显著富集在8个代谢通路上,以牛磺酸和亚牛磺酸代谢通路富集最显著。慢性冷暴露虽然导致肝脏多个生物学通路发生了显著变化,但每个通路上所富集的代谢物均很少。[结论]慢性冷暴露对民猪肝脏代谢的影响要大于急性冷暴露,冷暴露改变了肝脏的脂质代谢和糖代谢,慢...     

钛合金高速铣削力的有限元分析

将钛合金Ti6Al4V高速铣削加工过程简化为二维切削有限元模型,运用ABAQUS分析得到了加工参数及刀具几何参数对铣削力的影响。由结果得出:刀具转速与进给量从600rpm,10mm/s变化到2400rpm,40mm/s时对最大切向力与最大切深抗力的影响较为显著;刀具前角在5~15°范围内的增大有利于铣削力的降低。     

短梗胡枝子的组织培养研究

[目的]研究短梗胡枝子（Lespedeza cyrtobotrya）的组织培养。[方法]以短梗胡枝子种子为材料,对其组织培养进行了系统研究。[结果]2.1%次氯酸钠灭菌8 min,发芽率较高,且污染率为0;在初代培养中,基础培养基为MS,6-BA对分化系数影响达到显著水平,适宜的增殖培养基为MS＋1.00 mg/L6-BA＋0.10 mg/LNAA＋0.01 mg/L2,4-D,分化系数可达6.69;在继代培养中,适宜的培养基为MS＋1.00 mg/L6-BA＋0.05 mg/L2,4-D;在生根培养中,IBA浓度为0.50 mg/L时,生根率和平均生根数都最佳。[结论]为进一步开展胡枝子基因工程遗传改良提供了理论依据。     

种公牛耳组织成纤维细胞的分离与培养

哺乳动物细胞培养始于20世纪50年代,发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法.近年来,体细胞克隆技术得到迅速发展,不同细胞类型供体的克隆动物相继产生.