天峻县牦牛巴氏杆菌的多重PCR检测

为确诊天峻县3头牦牛死亡的病原,对该病病原进行分离培养、动物试验、生化鉴定和多重PCR鉴定.结果表明,从3头牦牛中分离出3株多杀性巴氏杆菌;根据设计的特异引物通过多重PCR扩增,获得大小为460 bp的多杀性巴氏杆菌的种特异性Kmt1基因和760 bp的血清型bcbD基因的特异性条带,这3株巴氏杆菌的血清型是荚膜B型;3株分离菌对喹诺酮类合成抗菌药物如氧氟沙星、培氟沙星、氟罗沙星,氯霉素类药物氟苯尼考及部分头孢类药物如头孢曲松、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑啉等敏感.     

牛羊肉中肠出血性大肠杆菌O_(157):H_7的检测

[目的]为青海省部分地区市售的羊肉、牛肉进行了大肠杆菌O157:H7的检测。[方法]样品先用mEC肉汤增菌,然后在选择性培养基TC-SMAC培养,再根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157:H7rfbE、fliC和eacA抗原基因的保守序列设计3对引物,进行多重PCR鉴定,将可疑菌接种于MUG-LST,进行微量生化试验鉴定。[结果]在各1株牛、羊肉分离菌中多重PCR同时扩增出了大小为678、560和368 bp的3条特异性条带,分离菌的生化反应特性符合大肠杆菌的特征。[结论]在羊、牛肉各1份样品中检出了E.coli O157:H7。     

牛羊肉中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测

[目的]为青海省部分地区市售的羊肉、牛肉进行了大肠杆菌O157∶H7的检测.[方法]样品先用mEC肉汤增菌,然后在选择性培养基TC-SMAC培养,再根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157∶H7 rfbE、fliC 和 eacA 抗原基因的保守序列设计3对引物,进行多重PCR鉴定,将可疑菌接种于MUG-LST,进行微量生化试验鉴定.[结果]在各1株牛、羊肉分离菌中多重PCR同时扩增出了大小为678、560和368 bp的3条特异性条带,分离菌的生化反应特性符合大肠杆菌的特征.[结论]在羊、牛肉各1份样品中检出了E.coliO157∶H7.     

高钙高钠日粮致蛋仔鸡代谢障碍的研究

以蛋小鸡配合饲料为基础日粮，添加石粉、食盐分别配制成含钙５．５８％、１０．２０％；含食盐２．３３％；含钙和食盐５．５５％、２．２９％；１０．１７％、４．２３％的高钙、高钠和高钙钠饲料分别饲喂３日龄蛋仔鸡，于１５、３０、４５和６０日龄进行血液化学成份测定。结果表明：各试验组鸡采食量、增重和存活率明显低于对照组（ｐ＜０．０５或ｐ＜０．０１）；试验日粮抑制磷、锌的吸收并损害肾功能而致血磷、锌降低，血钙、尿酸升高。据此提出血浆钙、磷、锌和血液尿酸的变化可作为诊断掺假高钙和高钙钠饲料所致蛋仔鸡代谢障碍的临床生化指标。     

青海省互助县牦牛弓形虫病血清学调查

应用IHA方法对青海省互助县7个地区100份牦牛血清进行了弓形虫病血清学调查,以抗体效价≥1:64为阳性判定标准,结果表明互助县7个地区不同程度感染牦牛弓形虫病,平均感染率为12.15%。并且不同性别的牦牛弓形虫阳性率差异不显著(P0.05),说明互助地区的牦牛群中弓形虫病的阳性率与性别无关。     

猪圆环病毒2型ORF5编码非结构蛋白的表达

【目的】探讨猪圆环病毒2型(PCV-2)中ORF5所编码非结构蛋白(NS)的功能。【方法】根据Gen-Bank已发表PCV-2基因组序列设计特异引物,分别以HZ0201株(AY188355)、美国98-15237株病毒DNA为模板,采用PCR法扩增PCV-2ORF5基因,并构建了pGEX-4T-1-ORF5原核表达载体和pEGFP-C2-ORF5真核表达载体,对ORF5重组蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析,用真核表达载体pEGFP-C2-ORF5转染PCV-2易感细胞PK-15。【结果】PCV-2ORF5基因长162bp,编码54个氨基酸;其所编码蛋白在E.coli中以包涵体形式存在,分子质量大小约为32ku。【结论】PCV-2ORF5编码重组蛋白在真核PK-15细胞中成功表达。     

新城疫病毒V蛋白C端酵母双杂交诱饵质粒的构建与鉴定

为构建新城疫病毒(NDV)V蛋白C端酵母双杂交诱饵质粒,用RNA试剂盒提取NDV F48E9株的RNA,通过反转录试剂盒将抽提的RNA反转录,以反转录合成的eDNA为模板,通过PCR扩增,获得V蛋白C端基因(VCTD).通过酶切连接的方法将V蛋白C端基因克隆至pGBKT7载体上,命名为pGBKT7-VCTD.将pGBKT7-VCTD转化酵母Y2H Gold酵母感受态细胞,转化产物涂布营养缺陷型平板,观察平板上菌落生长情况,判定诱饵质粒有无自激活能力:同时挑取平板上的生长的菌落接种液体培养基培养,绘制生长曲线,判定pGBKT7-VCTD诱饵质粒有无毒性.酶切和测序结果表明,成功构建pGBKT7-VCTD诱饵质粒,且该诱饵质粒在酵母细胞中无毒性和自激活能力.本研究成功构建了pGBKT7-VCTD诱饵质粒,为筛选NDVV蛋白C端纳米抗体奠定基础.     

发酵床养殖模式对牦牛寄生虫病防治及生产性能的影响

为探讨发酵床牦牛养殖模式对寄生虫病的防治效果，将120头体重均匀、体况良好的牦牛随机分为3个组（A、B、C），其中A组对垫料进行堆积发酵处理，并在试验期内进行2次驱虫，B组只对垫料进行堆积发酵处理，C组为对照组，不做任何处理。对3个组分别在发酵处理前15 d(-15 d)、处理当天（0 d），及进牦牛后45、90、120 d，采集发酵床表层垫料及新鲜牦牛粪样，采用饱和盐水漂浮法、虫卵沉淀法、麦克马斯特氏法进行寄生虫虫卵定性和定量检测，同时测定各组牦牛的体长和体高；从垫料发酵开始，每天测量3组试验牦牛发酵床垫料表层下20cm处的温度，连续测量15d。结果显示：A组、B组垫料最高温度分别达到（60.1±0.2）℃和（60.1±0.3）℃，其中A组显著高于C组（P <0.05）,B组极显著高于C组（P <0.01），且发酵过程中A组和B组垫料的温度均维持在50℃以上；3组的垫料中都发现有蛔虫卵、吸虫卵、绦虫卵和球虫卵，但A组在牦牛进入后45 d时蛔虫卵和绦虫卵转阴，B组在试验期间始终能检测到虫卵，但有下降趋势，而C组在整个试验期间一直有虫卵存在，且数量呈持续上升趋势；A组牦牛的体...