鼠金黄色葡萄球菌的分离与鉴定

20 0 1年 9月 1 1日 ,我市某动物房饲养的 1 0 0 0多只小鼠中 ,有 60多只发现以溃疡性皮炎为主要特征的传染病。病鼠被毛耸立 ,精神萎靡 ,面部和颈部自然溃烂。公鼠生殖器包皮腺脓肿 ,在腹股沟和阴茎基部形成坚实、隆起的结节。母鼠受精、妊娠率下降。鼠群发病 1周 ,死亡 1 0只 ,其余因采食量下降而造成贫血、极度消瘦。剖检后 ,发现肝脏和肾脏肿大 ,睾丸和子宫充血、出血 ,有多量血红色胶冻样炎性渗出物。经细菌学鉴定 ,确诊为金黄色葡萄球菌感染。报告如下 :1　材料与方法1 .1　材料1 .1 .1　培养基 :普通营养琼脂、鲜血琼脂和高甘露醇琼…     

恒河猴和食蟹猴血液蛋白遗传多样性分析

以碳酸酐酶、腺苷脱氨酶、转铁蛋白、维生素D结合蛋白、血浆酯酶、碱性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、红细胞酯酶为llIL液蛋白标记,对恒河猴指明亚种(120只)和食蟹猴柬埔寨亚种(120只)2个群体的遗传多态性进行遗传俭测.结果表明:恒河猴和食蟹猴的多态性位点百分数、等位基因数和平均杂合度分别为0.625、2.80、0.549 0和0.750、2.83、0.378 9.恒河猴群体具有高度的遗传多态性,食蟹猴群体具有中等的遗传多态性.Hardy-Weinberg平衡状态检验表明,2个群体均未明显偏离Hardy-Weinberg平衡.     

ELISA 检测新城疫病毒抗体

用鸡红细胞凝集解脱法提纯的新城疫病毒(NDV)抗原包被酶标板,最适抗原浓度为0.1μg～8μg/孔;鸡血清的最适稀释倍数为1:400.该抗原与马立克氏病等七种禽病抗血清不发生交叉反应.与血凝抑制试验(HI)比较.在检测的233份血清样本中,ELISA 阳性124份(占53%);HI 效价1:8以上者为84份(占36%);84份 HI 阳性样品,ELISA 亦为阳性;40份 HI 阴性样品,ELISA却为阳性;没有 ELISA 阴性而 HI 阳性的样本.两法可追求检测结果一致的为193/233(占83%).     

HPV16(E6-E7)转基因小鼠肿瘤细胞系的建立与生物学特性观察

对转基因小鼠HPV16(E6-E7)所形成的肿瘤进行原代培养,体外传代观察,传40代后对培养细胞的形态学、生长动力学、免疫组织化学、细胞核型和致瘤性等生物学特性进行分析。结果表明,该细胞系已在体外培养生存1年以上,传120代;细胞形态多样,以多角形、短梭形为主;染色体核型为非整倍体,众数58~62条;软琼脂集落形成率为18.5%;细胞体外生长倍增时间为47.2 h;免疫组织化学检测到HPV16-E6蛋白,而未检出p53;裸鼠移植成瘤率为100%。该研究成功建立了转基因小鼠HPV16(E6-E7)肿瘤细胞系,为HPV发病机制的研究和治疗药物筛选提供了新的可靠材料。     

鸡胚移植方法的改进

禽类在生理解剖学构造和生殖生理学机能方面与哺乳动物差异很大，因此禽类胚胎操作技术就成为一个不同于家畜胚胎生物技术的研究领域。禽类胚胎操作技术是禽类遗传工程必不可少的重要环节，也是发育生物学、医学等学科常用的研究手段。本文就鸡卵和胚胎移植方法作一介绍。...     

脑部特异表达SV40Tag转基因动物模型的建立

将猿猴病毒抗原蛋白(SV40Tag)片段克隆进脑部特异表达载体pMM279中,通过显微注射法制作转基因小鼠。采用PCR和Southern blotting检测目的基因整合,并通过RT-PCR检测目的基因的表达。结果表明:共出生29只仔鼠,经PCR检测出3只阳性,Southern blotting检测出2只阳性。RT-PCR检测到SV40Tag仅在前脑部皮层和海马表达。成功获得的脑部特异表达SV40Tag转基因小鼠模型,为SV40Tag的致病机制及脑肿瘤的治疗等研究提供工具。     

犬瘟热病毒扬州分离株融合蛋白F和附着蛋白H基因的序列分析

根据Genbank犬瘟热病毒(CDV)毒株序列分别设计融合蛋白F和附着蛋白H全基因的2对引物,以2个CDV扬州分离株(CDV-YZ0101、CDV-YZ0102)为模板RT-PCR扩增出H基因和F基因2个片段,将其克隆进pGEM-Teasy载体,并进行序列分析.结果表明H基因的开放阅读框架(ORF)为1 824 bp,2种分离株间核苷酸和编码氨基酸同源性达98%左右,与中国长春分离株、美国、日本分离株的同源性分别为96%、93%～95%和90%～91%.氨基酸分析显示扬州分离株与其他分离株的H蛋白有8～9个可能的天冬酰胺糖基化位点,而OP-CDV疫苗株只有4个类似位点.扬州分离株与长春分离株同属一个系,与美国、日本分离毒株以及疫苗株相比,均存在着明显的差异.F基因ORF为1 989 bp,不同毒株间的核苷酸及编码氨基酸差异主要表现在信号肽区域,而编码的F0前体蛋白表现出较高同源性(97%～99%),且所有的13个半胱氨酸残基、4个可能的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区域均完全一致.因此CDV F与H蛋白基因相比有很高的同源性,证明中国分离株与国外参考株有差异.     

不同品系小鼠体外受精方法的研究

对CD-1、B6DF1和C57BL／6小鼠的卵母细胞采用直接、去卵丘细胞、切割透明带法处理后,分别进行体外受精、体外培养和胚胎移植试验。结果表明：CD-1和B6DF1小鼠体外受精率及受孕率均高于近交系C57BL／6小鼠。3个品系小鼠卵母细胞3种不同处理试验,受孕率差异均不显著;去卵丘细胞卵体外受精率(11％～23％)均显著低于卵丘卵母细胞复合体的受精率(34％～60％)和切割透明带卵的受精率(48％～65％),而C57BL／6小鼠的卵经切割透明带后体外受精率显著高于卵丘卵母细胞复合体的受精率。C57BL／6小鼠理想的体外受精方法为切割透明带法,而CD-1、B6DF1小鼠切割透明带卵受精率与其卵丘卵母细胞复合体的受精率差异均不显著,因此这2个品系可直接用卵丘卵母细胞复合体进行体外受精,其方法简单、有效。     

共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建

以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-H1基因。按常规方法克隆进pEF6V5His A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48h后进行间接免疫荧光试验,72h后用Blasticidin进行筛选,挑选出能稳定表达B7-H1的细胞株。结果表明：成功地克隆小鼠B7-H1基因并构建了用于表达B7-H1基因的真核表达载体,经间接免疫荧光试验证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经Western-blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-H1基因。     

Tet-on系统诱导表达c-myc转基因小鼠的建立

从Heta细胞RNA中通过RT-PCR扩增出c-myc基因的cDNA,将c-myc cDNA克隆入Tet-on系统的反应元件pTRE2载体,与含有Tet-on系统的调控元件pBC-rtTA基因混合显微注射到FVB小鼠受精卵的雄原核中,共注射603枚卵,将注射后存活的263枚卵移植到21只假孕母鼠输卵管内,有17只怀孕,共产仔59只.PCR和Southern blotting检测有2只双基因阳性公鼠和1只c-myc单基因阳性公鼠.3只公鼠的F1代PCR检测表明,其携带的c-myc外源基因均具有遗传性.